原代小鼠肝細胞體外培養(yǎng)的研究.pdf

1、肝臟是體內(nèi)功能最多、最復(fù)雜的臟器，是一個物質(zhì)合成、代謝與代謝調(diào)節(jié)的場所，是生理和病理狀態(tài)下，能量代謝、毒素的生物轉(zhuǎn)化以及血漿蛋白質(zhì)合成的中心器官，是機體最重要的器官之一。肝臟作為機體重要的代謝器官，一直倍受關(guān)注，但由于體內(nèi)研究受眾多因素的影響，因而肝細胞培養(yǎng)作為一種體外研究手段，越來越多地被應(yīng)用。由于肝細胞是一種分化程度很高的細胞，一旦失去體內(nèi)生存環(huán)境，則很快失去分化再生的能力，它的一些生化功能也很快喪失。目前，多采用原代肝細胞培養(yǎng)技術(shù)

2、，主要由于原代肝細胞在一定條件下，在短期培養(yǎng)期間還具有體內(nèi)肝細胞的一些功能及活性，也能最接近和反映體內(nèi)生長特性。因此，原代肝細胞培養(yǎng)技術(shù)具有重要意義。 在原代小鼠肝細胞分離及培養(yǎng)的試驗中，采用植塊培養(yǎng)和分離細胞培養(yǎng)兩種分離、培養(yǎng)肝細胞的方法，通過體外培養(yǎng)比較，發(fā)現(xiàn)植塊培養(yǎng)法分離得到的肝細胞數(shù)量較低；該法多適用于新生動物或動物胚胎肝細胞培養(yǎng)，其優(yōu)點是操作簡單、經(jīng)濟，一般實驗室易于開展。分離細胞培養(yǎng)法能夠獲得大量細胞形態(tài)完整、肝功能

3、較強的肝細胞；該法具有分離效果好、操作簡單、酶價格便宜等特點。通過對體外培養(yǎng)肝細胞供體小鼠性別和年齡的研究比較，結(jié)果表明從雌性壯齡小鼠獲取的肝細胞，即時存活率高，分離難度較低，細胞增殖能力較強，同時保持著較高的肝功能(Urea的合成量)，更適于體外長期或短期培養(yǎng)研究。 肝細胞培養(yǎng)條件特殊，不能采用常規(guī)血清濃度培養(yǎng)基，多采用無血清或低血清培養(yǎng)液。在小鼠肝細胞無血清培養(yǎng)條件的研究試驗中，采用在基礎(chǔ)培養(yǎng)基RPMI1640中添加大豆發(fā)酵

4、液成分的方法，通過對發(fā)酵液離心速度、離心時間、添加量及合成培養(yǎng)液pH四因素的綜合試驗、分析，確定最優(yōu)培養(yǎng)條件為：離心速度1500r/min，離心時間5min，添加量20％，培養(yǎng)液pH7.20。在此培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的肝細胞與含血清培養(yǎng)條件進行同期培養(yǎng)對照，從生長曲線來看，所設(shè)計的培養(yǎng)液能夠提供肝細胞體外培養(yǎng)所需的營養(yǎng)成分；從Urea和Alb檢測結(jié)果來看，培養(yǎng)的肝細胞是具有一定生物學(xué)特性及功能的肝細胞；從肝細胞形態(tài)可以看出，該培養(yǎng)液培養(yǎng)的肝細