生化湯特質(zhì)基礎(chǔ)和配伍機(jī)理的研究.pdf

1、目的:闡述生化湯(Shenghua decoction,SHD)的物質(zhì)基礎(chǔ)和配伍機(jī)理。
　　 方法:按照中醫(yī)組方原則,設(shè)計(jì)不同缺藥配伍組方,采用藥效學(xué)研究不同配伍組方與全方之間差異,采用中藥指紋圖譜技術(shù)建立不同配伍組方體內(nèi)外化學(xué)成分譜,并將體內(nèi)外化學(xué)成分譜與藥效學(xué)建立聯(lián)系(即譜效關(guān)系),闡述生化湯的物質(zhì)基礎(chǔ)及配伍機(jī)理。
　　 第一節(jié)生化湯不同配伍組方之間藥效學(xué)的比較
　　 1.按照“君臣佐使”的中醫(yī)組方原理,撤藥

2、分析法制備生化湯各配伍組方的水煎液(各配伍組方水煎液最后均濃縮定容至同一體積,折合含當(dāng)歸0.56g/ml)。
　　 2.藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)分組及給藥方式:SD大鼠隨機(jī)分為正常組(NS)、模型組(MG)、不同配伍組方的給藥組(S1～S5)。按20 ml/kg的給藥容積灌胃給予各組大鼠相應(yīng)的生化湯配伍組方水煎液,每天2次,連續(xù)5天。
　　 3.末次給藥40 min后尾靜脈注射10％高分子右旋糖酐(High moleculardext

3、ran,HMD)制作急性血瘀(Acute blood stasis,ABS)模型,20 min后采血,一部分血液用肝素抗凝,檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo):血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉方程K值及紅細(xì)胞電泳指數(shù);另一部分血液用消炎痛-EDTA.Na2抗凝,分離血漿,放射免疫法測(cè)TXB2和6-Keto-PGF1α。
　　 4.末次給藥30 min后腹腔注射縮宮素制成原發(fā)性痛經(jīng)(Primarydysmenorrhea,PD)模型,觀察30 mi

4、n內(nèi)扭體次數(shù):然后取血,分離血漿,可見(jiàn)分光光度法測(cè)T-SOD活力及MDA含量;取子宮并稱(chēng)重,計(jì)算子宮系數(shù);制備10％子宮組織勻漿,可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)T-NOS活力、NO和蛋白含量。
　　 第二節(jié):生化湯不同配伍組方之間體外化學(xué)成分譜的比較及譜效關(guān)系分析
　　 1.甲醇沉淀法處理生化湯各配伍組方水煎液,制成供試品溶液。
　　 2.采用C18色譜柱,甲醇-0.2％甲酸為流動(dòng)相線(xiàn)性梯度洗脫,流速為1.0ml/min,柱

5、溫30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm,建立生化湯各配伍組方體外化學(xué)成分譜。
　　 3.從整體上考察各缺藥組方與全方之間體外化學(xué)成分譜的差異,并結(jié)合藥效學(xué)的差異,進(jìn)行譜效關(guān)系分析。
　　 第三節(jié):生化湯不同配伍之間體內(nèi)化學(xué)成分譜的比較及譜效關(guān)系分析
　　 1.按20 ml/kg的給藥容積灌胃給予大鼠相應(yīng)生化湯配伍組方的水煎液,每天2次,連續(xù)5天,末次給藥60min后取血制備含藥血漿。
　　 2.甲醇沉淀蛋白法處理

6、各生化湯各配伍組含藥血漿。
　　 3.采用C18色譜柱,以甲醇-0.2％甲酸為流動(dòng)相線(xiàn)性梯度洗脫,流速為1.0ml/min,柱溫30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm,建立生化湯不同配伍組方血漿化學(xué)成分譜。
　　 4.從整體上考察各缺藥配伍組方與全方之間血漿化學(xué)成分譜的差異,并結(jié)合藥效學(xué)的差異,進(jìn)行譜效關(guān)系分析。
　　 結(jié)果:第一節(jié):生化湯不同配伍組方之間藥效學(xué)的比較
　　 1.生化湯全方對(duì)HMD引起的急性血瘀證,

7、及對(duì)縮宮素引起的原發(fā)性痛經(jīng)證均起到良好的治療作用,且優(yōu)于其它缺藥配伍組方。
　　 2.缺炙甘草組方以及缺炮姜炙甘草組方對(duì)大鼠子宮系數(shù)、30 min內(nèi)扭體次數(shù)、血漿中的MDA、T-SOD等指標(biāo)的影響與生化湯全方相比均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 3.缺桃仁炮姜炙甘草組方對(duì)大鼠子宮系數(shù)、30 min內(nèi)扭體次數(shù)、MDA、T-SOD、血漿黏度、TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α等指標(biāo)的影響與生化湯

8、全方相比均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 4.當(dāng)歸方對(duì)大鼠子宮系數(shù)、30 min內(nèi)扭體次數(shù)、MDA、T-SOD、血漿黏度、TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞電泳指數(shù)、血沉方程K值、TNOS和NO等指標(biāo)的影響與生化湯全方相比均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 第二節(jié):生化湯不同配伍組方之間體外化學(xué)成分譜的比較及譜效關(guān)系分析
　　 1.隨著藥味的缺

9、失,生化湯各配伍組方與全方的化學(xué)成分譜之間的相似度逐漸減小。
　　 2.與生化湯全方相比,缺炙甘草組方體外化學(xué)成分譜缺失了17、18、25、26、29號(hào)峰;同時(shí)5、7、11、16、19、24、30號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 3.與生化湯全方相比,缺炮姜炙甘草組方體外化學(xué)成分譜缺失了15、17、18、25、26、29號(hào)峰:同時(shí)7、11、16、19、24、30號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜

10、0.05或P＜0.01)。
　　 4.與生化湯全方相比,缺桃仁炮姜炙甘草組方體外化學(xué)成分譜缺失了15、17、18、25、26、29號(hào)峰;同時(shí)1、6、7、11、13、14、16、19、24、30號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 5.與生化湯全方相比,當(dāng)歸方的體外化學(xué)成分譜缺失了3、10、12、15、17、18、21、22、25、26、27、28、29號(hào)峰;同時(shí)1、4、6、7、8、9、11、13

11、、14、16、19、20、23、24、30號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 第三節(jié):生化湯不同配伍之間體內(nèi)化學(xué)成分譜的比較及譜效關(guān)系分析
　　 1.與體外化學(xué)成分譜比較,生化湯全方血漿化學(xué)成分譜中2、5、7、10、11、14、16、17、18、19、20號(hào)峰為直接吸收入血的原型成分;a、b、c、d、e、f、g、h、I、j、k、L號(hào)峰可能為原方中化學(xué)成分在血漿中的結(jié)合物或其代謝產(chǎn)物。
　

12、　 2.與生化湯全方相比,缺炙甘草組方血漿化學(xué)成分譜缺失了17、d、e、L號(hào)峰;同時(shí)7、20、g號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 3.與生化湯全方相比,缺炮姜炙甘草組方血漿化學(xué)成分譜缺失了17、d、e、L號(hào)峰;同時(shí)19、20、g號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 4.與生化湯全方相比,缺桃仁炮姜炙甘草組方血漿化學(xué)成分譜缺失了17、d、e、L號(hào)峰:同時(shí)5、16、1

13、8、19、20、g號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 5.與生化湯全方相比,當(dāng)歸方血漿化學(xué)成分譜缺失了11、17、d、e、f、h、L號(hào)峰;同時(shí)2、5、7、10、14、16、18、19、20、b、c、g、I、j、k號(hào)峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 結(jié)論:生化湯全方的藥效最好,其組方配伍是科學(xué)、合理的;全方中29個(gè)化學(xué)成分可能是生化湯物質(zhì)基礎(chǔ)的組成部分;生化湯給予大鼠