在線SPE-HPLC-DAD系統(tǒng)和在線SPE-HPLC-MS-MS系統(tǒng)在核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥代動(dòng)力學(xué)研究中的應(yīng)用.pdf

1、當(dāng)前，隨著臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究的不斷發(fā)展，對(duì)分析方法的要求也越來越高，并且由于生物樣本的復(fù)雜性，使得體內(nèi)藥物分析方法的建立困難。因此，迫切需要建立靈敏度更高、準(zhǔn)確性更好、速度更快、效率更高的科學(xué)分析方法對(duì)生物樣品中的目標(biāo)化學(xué)成分進(jìn)行定性定量研究。在線固相萃取這一先進(jìn)的樣品前處理技術(shù)的出現(xiàn)，很好的滿足了以上分析需求。本文依據(jù)此技術(shù)建立了全自動(dòng)在線SPE-HPLC-DAD系統(tǒng)和在線SPE-HPLC-MS/MS系統(tǒng)并分別應(yīng)用于拉米夫定和司他夫

2、定的藥代動(dòng)力學(xué)研究中，從而實(shí)現(xiàn)了省時(shí)、省力、高通量。
　　 基于以上所述，本文研究內(nèi)容包括以下幾點(diǎn):
　　 (1)建立全自動(dòng)在線SPE-HPLC-DAD方法測(cè)定小鼠血漿中拉米夫定的血藥濃度，研究拉米夫定在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征。色譜條件:LiChrospher(R)RP-18ADS在線SPE柱(25 mm×4 mm，25μm)，洗脫劑為5 mmol·L1KH2PO4緩沖液(pH6.5)，Venusil MP C18分析柱（

3、150 mm×4.6 mm，5μm），洗脫劑采用乙腈-5mmol·L-1 KH2P04緩沖液(pH6.5)(8∶92，V/V)，流速1 ml/min，等度洗脫;檢測(cè)波長272 nm。單個(gè)樣品分析時(shí)間為10 min。拉米夫定線性范圍為100-50000ng·mL-1，最低定量限為100 ng·mL-1，絕對(duì)回收率為91.91-100.78％，日內(nèi)、日間精密度RSD為4.23-9.57％，短期、凍融及長期穩(wěn)定性RSD均小于5.08％。

4、>　　 (2)建立司他夫定的全自動(dòng)在線SPE-HPLC-DAD測(cè)定方法。色譜條件:LiChrospher(R)RP-18 ADS在線SPE柱(25 mm×4 mm，25μm)，洗脫劑為5mmol·L-1KH2PO4緩沖液(pH6.5)，VenusilMP C18分析柱(150mm×4.6mm，5μm)，洗脫劑采用乙腈-5 mmol·L-1 KH2PO4緩沖液(pH6.5)(5∶95，V/V)，流速1 ml/min，等度洗脫;檢測(cè)波長2

5、67nm，單個(gè)樣品分析時(shí)間為18 min。司他夫定線性范圍為200-20000 ng·mL-1，最低定量限為200 ng·mL-1，絕對(duì)回收率為98.58-100.76％，日內(nèi)、日間精密度RSD為2.06-2.70％，短期、凍融及長期穩(wěn)定性RSD均小于4.08％。
　　 (3)建立司他夫定的全自動(dòng)在線SPE-HPLC-MS/MS測(cè)定方法，研究司他夫定在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征。并采用響應(yīng)面法(RSM)進(jìn)行優(yōu)化，確定該方法的最優(yōu)條件:

6、分析柱洗脫劑采用乙腈-10 mmol·L-1醋酸銨緩沖液(pH7)(20∶80，V/V)，流速1 ml/min，等度洗脫;SPE柱洗脫劑為10 mmol·L-1醋酸銨緩沖液(pH7);基質(zhì)洗脫時(shí)間(t(M))1 min，反向洗脫時(shí)間(t(T))1 min。掃描目標(biāo)化合物司他夫定離子對(duì)為m/z225.2→m/z127.1，掃描時(shí)間為5 min。司他夫定線性范圍為20-10000 ng·mL-1，最低定量限為20.0 ng·mL-1，絕對(duì)回