雌激素通過雌激素受體β上調(diào)IL-6分泌促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展.pdf

1、目的：肺癌是世界上死亡率最高的惡性腫瘤，其中非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）占肺癌總數(shù)85％左右。已有大量文獻(xiàn)報(bào)道白介素-6（IL-6）是NSCLC中關(guān)鍵的腫瘤促進(jìn)細(xì)胞因子。前期研究發(fā)現(xiàn)雌激素主要通過雌激素受體β（ERβ）在NSCLC的進(jìn)展中起重要促進(jìn)作用。已有研究證實(shí)雌激素與 IL-6信號(hào)通路相互作用，協(xié)同促進(jìn)乳腺癌、卵巢癌等雌激素靶器官腫瘤的進(jìn)展。但在雌激素非靶器官肺癌中雌激素和 IL-6有無相互作用還未見報(bào)道，雌激素是否能夠調(diào)節(jié)NSCL

2、C細(xì)胞IL-6的分泌還不得而知。本研究首先檢測ERβ與IL-6在NSCLC組織中的表達(dá)和相關(guān)性，然后在體外實(shí)驗(yàn)中探討NSCLC中雌激素對(duì)IL-6分泌的調(diào)控及其可能的機(jī)制，為NSCLC內(nèi)分泌和免疫治療策略提供新的理論基礎(chǔ)和方向。
　　方法：本課題分兩部分進(jìn)行研究：
　　第一部分在人NSCLC組織中檢測ERβ和IL-6的表達(dá)，分析其表達(dá)相關(guān)性和共表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。應(yīng)用組織芯片技術(shù)和免疫組化方法，檢測2012年2月-201

3、4年2月我院手術(shù)的103例NSCLC腫瘤組織和98例癌旁正常肺組織中 ERβ和 IL-6的表達(dá)。應(yīng)用卡方檢驗(yàn)分析 ERβ和 IL-6表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的相關(guān)性，用Spearman等級(jí)法分析ERβ和IL-6之間表達(dá)的相關(guān)性。
　　第二部分在體外實(shí)驗(yàn)探討NSCLC中雌激素通過ERβ對(duì)IL-6分泌的影響及其可能的機(jī)制：1.NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549分別給予不同濃度梯度（1nM,10nM,100nM）17β-雌二醇（17β-est

4、radiol，E2，ER配體）處理，用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6的含量，以探討IL-6分泌是否與雌激素濃度相關(guān)；2.將NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549分為7組：空白對(duì)照（con）組、E2組、PPT（ERα特異性激動(dòng)劑）組、DPN（ERβ特異性激動(dòng)劑）組、氟維司群（Fulvestrant，F(xiàn)ul，雌激素抑制劑）組、E2+Ful組、DPN+Ful組，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6的含量，Western-blot檢測細(xì)胞內(nèi)IL-6

5、表達(dá)，以探討雌激素通過ERβ調(diào)節(jié)IL-6分泌和表達(dá)；3.將NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549分為6組處理：空白對(duì)照（con）組、E2組、Ful組、E2+Ful組、E2+IL-6組、 E2+Ful+IL-6組，檢測細(xì)胞增殖（CCK8），以探討雌激素上調(diào)IL-6分泌對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響；4.將NSCLC系A(chǔ)549分為6組處理：con組、E2組、Ful組、E2+Ful組、E2+Ful+MAPK抑制劑（U0126）組、 E2+Ful+PI3K（LY294

6、002）抑制劑組，Western-blot分別檢測t/pMAPK、t/pAkt的表達(dá)，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6的含量，以探討雌激素上調(diào)IL-6分泌的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：通過組織芯片-免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)：NSCLC中ERβ表達(dá)陽性率為91.3％(94/103)，癌旁正常肺組織中ERβ表達(dá)陽性率為57.1％(56/98)，NSCLC中ERβ顯著過表達(dá)。在NSCLC中IL-6表達(dá)陽性率為89.3％(92/103)，

7、癌旁正常肺組織中IL-6表達(dá)陽性率為42.9％(42/98)；NSCLC中IL-6顯著過表達(dá)。NSCLC中ERβ1、IL-6共表達(dá)陽性率為82.5％(85/103)，顯著高于癌旁正常肺組織中ERβ、IL-6共表達(dá)陽性率22.4％(22/98)。Spearman等級(jí)法分析ERβ與IL-6表達(dá)有正相關(guān)性，尤其在肺鱗癌中ERβ表達(dá)與IL-6表達(dá)有顯著相關(guān)性。
　　在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：1. NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549給予不同濃度梯度E2，細(xì)胞

8、培養(yǎng)上清中IL-6的含量隨E2濃度的增加而增加，E2誘導(dǎo)的促IL-6分泌作用可被其受體阻斷劑氟維司群(ful)阻斷，提示雌激素能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌IL-6；2.E2、DPN促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)IL-6蛋白的表達(dá)和培養(yǎng)液中IL-6分泌，E2+Ful、DPN+Ful組細(xì)胞內(nèi)IL-6表達(dá)和上清IL-6分泌較E2、DPN組明顯下降，同時(shí)發(fā)現(xiàn)PPT組IL-6蛋白的表達(dá)和培養(yǎng)液中IL-6分泌與對(duì)照組無明顯差異，提示雌激素通過ERβ調(diào)節(jié)IL-6分泌和表達(dá)；3.

9、細(xì)胞增殖的能力在E2組中較對(duì)照組明顯增強(qiáng)，E2+IL-6組細(xì)胞增殖能力較E2組增強(qiáng)，加入Ful后E2的促進(jìn)增殖作用被抑制，提示雌激素可能通過上調(diào)IL-6分泌促進(jìn)細(xì)胞增殖；4. pMAPK、pAkt在E2組表達(dá)升高，在E2+Ful、E2+Ful+MAPK抑制劑、 E2+Ful+Akt抑制劑組中下降，同時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液上清中IL-6的含量在E2+Ful、E2+Ful+MAPK抑制劑、 E2+Ful+Akt抑制劑組下降，提示雌激素通過ERβ激活M

10、APK和Akt通路上調(diào)IL-6分泌。
　　結(jié)論：在這項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)，ERβ與IL-6在NSCLC組織中存在過表達(dá)，ERβ表達(dá)與IL-6的表達(dá)在NSCLC組織中具有正相關(guān)。雌激素能夠通過ERβ促進(jìn)NSCLC細(xì)胞IL-6分泌，進(jìn)而促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖，其機(jī)制可能與激活MAPK和Akt信號(hào)通路有關(guān)，因此認(rèn)為ERβ可能通過激活I(lǐng)L-6免疫信號(hào)通路而在NSCLC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，這可能是雌激素促進(jìn)NSCLC進(jìn)展的重要機(jī)制之一，更進(jìn)一步