Mig-7在膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)和侵襲性的基礎與臨床研究.pdf

1、膠質(zhì)母細胞瘤（glioblastoma，GMB）是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤，其特點包括復發(fā)率高、侵襲性強、預后差等。目前，膠質(zhì)瘤患者常采用多種聯(lián)合治療手段，如手術治療、化療、放療以及免疫治療等，效果均不是很理想。近幾年隨著對膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的不斷探索，證實膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的形成參與腫瘤侵襲以及患者的預后情況,血管擬態(tài)的形成一方面加深了我們對于膠質(zhì)瘤微環(huán)境的了解、豐富了我們對膠質(zhì)瘤血管的認識；另一方面也對我們抗膠質(zhì)瘤治療提出了機遇和挑戰(zhàn)。因

2、此，抗血管生成擬態(tài)迅速成為抗膠質(zhì)瘤研究的熱點。
　　Mig-7（migration inducing protein7，遷移誘導蛋白）目前在多種腫瘤中表達，但在膠質(zhì)瘤中表達未見國內(nèi)外報道，同時Mig-7是否參與膠質(zhì)瘤侵襲和VM（vasculogenic mimicry，血管生成擬態(tài)）的形成，目前未見相關文獻報道。
　　目的：
　　一方面從臨床標本資料著手，研究膠質(zhì)瘤Mig-7的表達與血管生成擬態(tài)、腫瘤分級以及膠質(zhì)瘤患者

3、的預后情況的相關性。另一方面從體外細胞水平出發(fā)，探究Mig-7參與膠質(zhì)瘤細胞系的遷移侵襲和血管生成擬態(tài)的發(fā)生與發(fā)展，旨在為膠質(zhì)瘤患者治療選擇提供良好的實驗基礎。
　　方法：
　　1、采用免疫組化方法檢測Mig-7在不同級別膠質(zhì)瘤和對照組的表達情況，并統(tǒng)計學分析。
　　2、采用CD34+和PAS雙染方法檢測VM在不同級別膠質(zhì)瘤和對照組的表達情況，并統(tǒng)計學分析。
　　3、采用western-blot方法檢測Mig-7

4、不同級別膠質(zhì)瘤和對照組的蛋白表達情況，并統(tǒng)計學分析。
　　4、采用RNA干擾技術，篩選出Mig-7干擾后單克隆細胞株，并采用qPCR檢測各組之間Mig-7的RNA表達情況，并統(tǒng)計學分析。
　　5、采用Transwell小室方法檢測U87組、vector組和Mig-7 shRNA組遷移侵襲能力，并統(tǒng)計學分析。
　　6、采用三維培養(yǎng)技術檢測U87組、vector組和Mig-7 shRNA組形成血管生成擬態(tài)的能力，并統(tǒng)計學分

5、析。
　　結(jié)果：
　　1、Mig-7免疫組化結(jié)果表明：膠質(zhì)瘤病理標本Ⅰ+Ⅱ級20例，陽性率是20％（4/20）。膠質(zhì)瘤病理標本Ⅲ級20例，陽性率是75%（15/20）；膠質(zhì)瘤病理標本Ⅳ級20例，陽性率是75%（15/20）?？傮w表達陽性率56.7%。根據(jù)免疫組化評分，我們做統(tǒng)計學分析，由于一級膠質(zhì)瘤數(shù)量較少，我們把一級膠質(zhì)瘤和二級膠質(zhì)瘤合并為一組，結(jié)果為：總體單因素方差分析F=10.976，P=0.000；組間比較示：Ⅰ+Ⅱ

6、級與Ⅲ級差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.000）；Ⅰ+Ⅱ級與Ⅳ級的差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.000）；但是Ⅲ級與Ⅳ級的差異不具有統(tǒng)計學意義（P=0.436）。
　　2、CD34+和PAS雙染結(jié)果表明：CD34、PAS雙染膠質(zhì)瘤VM，膠質(zhì)瘤標本總陽性率為70%（42/60）Ⅰ+Ⅱ級陽性率為45%（9/20）；Ⅲ級陽性率75%（15/20）；Ⅳ級陽性率90%（18/20）；外傷腫瘤組織10例，陽性率0%（0/10）。采用單因素方差分析示

7、：F=70.325，P=0.000；Ⅰ+Ⅱ級與Ⅲ級差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.003）；Ⅰ+Ⅱ級與Ⅳ級的差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.000）；Ⅲ級與Ⅳ級的差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。
　　3、Mig-7的Western-blot結(jié)果顯示：根據(jù)蛋白定量，單因素方差分析：F=97.537，P=0.000；Ⅰ+Ⅱ級與Ⅲ級差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.000），Ⅰ+Ⅱ級與Ⅳ級差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.001）,同時Ⅲ級與Ⅳ級差異

8、具有統(tǒng)計學意義（P=0.005），正常腦組織組織完全不表達。同時將膠質(zhì)瘤患者的Mig-7的western-blot表達量（低表達組≤0.4，0.4＜中表達組≤0.6，高表達組＞0.6）與其生存時間做生存分析，發(fā)現(xiàn)低表達組平均生存時間為75.83月，中位生存時間為85.00月；中表達組平均生存時間為40.11，中位生存時間為36.00；高表達組平均生存時間為12.88，中位生存時間為10.00,（P＜0.05）。
　　4、Mig-7

9、 RNA干擾技術結(jié)果顯示：成功篩選出Mig-7 shRNA，并通過qPCR檢測U87組、vector組及Mig-7 shRNA組之間Mig-7RNA表達的差異性，即Mig-7 shRNA組與U87組、vector組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）5、Transwell小室檢測表明：Mig-7 shRNA組與U87組、vector組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；但U87組和vector組差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。