蛋白激酶A介導(dǎo)酒精引起的神經(jīng)元中Sim2的表達(dá).pdf

1、目的：在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中，胎兒酒精暴露會引起大量的神經(jīng)元凋亡，導(dǎo)致認(rèn)知障礙，記憶力下降。然而，酒精引起神經(jīng)元凋亡的作用機制尚待進(jìn)一步研究。已有研究表明，轉(zhuǎn)錄抑制因子Single-minded2(Sim2)參與唐氏綜合征(DS)和阿爾茲海默?。ˋD）等學(xué)習(xí)記憶障礙性疾病的發(fā)生；而且Sim2的過表達(dá)會引起神經(jīng)元損傷。然而，Sim2是否參與了酒精介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷，以及在此過程中是何信號通路調(diào)控Sim2的表達(dá)，并最終導(dǎo)致神經(jīng)元功能失調(diào)，尚

2、待闡明。
　　方法：在細(xì)胞水平及動物模型上研究酒精對Sim2表達(dá)及神經(jīng)元損傷的作用。采用Western Blot檢測不同濃度的酒精（50mM和100mM）處理下人的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y和原代大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元中Sim2及cleaved caspase3的蛋白表達(dá)水平；探討Sim2在酒精所致神經(jīng)元損傷中的作用。在此基礎(chǔ)上，干預(yù)Sim2的表達(dá)，進(jìn)一步明確其作用。同時使用出生后七天（P7）的C57BL/6小鼠頸部皮下注射20％的

3、酒精（2.5 g/kg）建立胎兒酒精暴露動物模型；在酒精處理前皮下注射蛋白激酶A抑制劑H-89，用Western Blot和免疫熒光雙標(biāo)法探討PKA信號通路抑制劑對酒精所致Sim2表達(dá)和神經(jīng)元損傷的影響。
　　結(jié)果：1.酒精能夠在細(xì)胞水平和動物水平增加Sim2及cleaved caspase3的蛋白表達(dá)：在SH-SY5Y細(xì)胞和原代培養(yǎng)神經(jīng)元中，分別使用50mM和100mM的酒精處理細(xì)胞，與對照組相比，酒精處理不同時間（12,24,

4、48 h）均可增加Sim2及cleaved caspase3的蛋白表達(dá)（P<0.05），并且兩者的表達(dá)趨勢一致。在酒精暴露小鼠模型皮質(zhì)中，與溶媒對照組相比，酒精顯著增加Sim2及cleaved caspase3的蛋白表達(dá)（P<0.05）；并且免疫熒光結(jié)果顯示，與對照組相比，酒精增加的Sim2主要表達(dá)在神經(jīng)元。
　　2.Sim2 shRNA慢病毒可沉默Sim2的表達(dá)并顯著降低cleaved caspase3的蛋白水平：使用Sim2

5、shRNA慢病毒處理SH-SY5Y細(xì)胞，與Scr shRNA組相比，Sim2 shRNA可顯著降低酒精所致的Sim2及cleaved caspase3的蛋白表達(dá)（P<0.05）；而Scr shRNA不能反轉(zhuǎn)酒精所致的Sim2及cleaved caspase3的表達(dá)。
　　3.酒精通過激活PKA信號通路引起Sim2和cleaved caspase3蛋白表達(dá)增加：在SH-SY5Y細(xì)胞中，H-89（PKA信號通路抑制劑）可顯著減少酒精引