2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:下調(diào)肝再生增強(qiáng)因子對H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷的影響
  目的:觀察ALR是否參與了細(xì)胞氧化應(yīng)激的病理過程,并探究下調(diào)ALR表達(dá)對H2O2誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷的影響。
  方法:采用H2O2誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,實時熒光定量PCR及Western blot檢測細(xì)胞ALR表達(dá)情況。設(shè)計特異性小干擾RNA(siRNA)下調(diào)HK-2細(xì)胞ALR表達(dá),以siRNA/control對照組,實

2、時熒光定量PCR、Western blot及免疫熒光驗證ALR干擾效果,MTS檢測細(xì)胞增殖能力。H2O2刺激12h后,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞活性氧(ROS)水平、線粒體膜電位變化及細(xì)胞凋亡情況;Western blot檢測凋亡蛋白Bcl-2/Bax表達(dá)水平及線粒體蛋白(Cyt C、Smac)釋放;激光共聚焦檢測Cyt C釋放。
  結(jié)果:實時熒光定量PCR及Western blot檢測顯示,與siRNA/control對照組比較,H2

3、O2刺激組細(xì)胞內(nèi)源性23kDALR mRNA及蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.05)。MTS結(jié)果顯示,下調(diào)23kD ALR表達(dá)對HK-2細(xì)胞增殖無明顯影響(P>0.05),但加重了H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。與siRNA/control組相比,細(xì)胞ROS水平顯著增加,膜電位降低細(xì)胞比例明顯增加,促進(jìn)了H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)及線粒體凋亡相關(guān)蛋白釋放,增加了H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
  結(jié)

4、論:23kD ALR參與了H2O2誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。下調(diào)23kD ALR表達(dá)可加重H2O2誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷。
  第二部分:23kD肝再生增強(qiáng)因子表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及功能研究
  目的:探究過表達(dá)23kD肝再生增強(qiáng)因子對人正常肝細(xì)胞(L-02)增殖及凋亡的影響。
  方法:構(gòu)建23kD ALR重組表達(dá)質(zhì)粒 pcDNA6/23kDALR。以MegaTran1.0轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染至L-02細(xì)胞,實時

5、熒光定量PCR及Western blot檢測細(xì)胞ALR mRNA及蛋白水平表達(dá)情況,MTS檢測細(xì)胞增殖能力,流式細(xì)胞儀檢測H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡變化。
  結(jié)果:成功構(gòu)建pcDNA6/23kDALR表達(dá)質(zhì)粒。實時熒光定量PCR及Western blot檢測顯示,與空質(zhì)粒對照組比較,L-02細(xì)胞過表達(dá)組23kD ALR表達(dá)顯著增加( P<0.01);與空質(zhì)粒對照組相比, pcDNA6/23kD ALR質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48h及72h細(xì)胞增殖顯

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