人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦創(chuàng)傷大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)HUCBMSCs分離、培養(yǎng)，在體外熒光標(biāo)記后植入腦創(chuàng)傷大鼠模型損傷區(qū)周圍，在移植后不同時(shí)間監(jiān)測(cè)HUCBMSCs在腦內(nèi)的生存、遷移、整合情況。并對(duì)移植組大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分和學(xué)習(xí)記憶能力的檢測(cè)，與對(duì)照組比較，免疫組織化學(xué)監(jiān)測(cè)分化情況。 方法：用密度梯度離心分離健康自然分娩產(chǎn)婦志愿捐獻(xiàn)的臍血單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)，以含20％胎牛血清的DMEM/F12進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后傾去全部液體以去除未貼壁細(xì)胞，以后每3d全量換

2、液一次，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。移植前以熒光標(biāo)記物Hoechst33258標(biāo)記NSCs30min后備用。采用自由落體撞擊法制作大鼠腦創(chuàng)傷模型。Wistar大鼠90只，隨機(jī)分為4組：假損傷組、損傷組、假移植組和移植組，前三組各22只，移植組24只，4組大鼠分別于損傷后2d及7d進(jìn)行大鼠行為學(xué)評(píng)分；于移植后2d和7d處死移植組大鼠各2只制作腦組織冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察移植細(xì)胞存活及遷移狀況；4組大鼠損傷后2w各處死2只，制備腦組

3、織切片行HE染色，計(jì)數(shù)額項(xiàng)葉皮層壞死神經(jīng)元；4組大鼠分別于損傷后2w和4w行Y迷宮試驗(yàn)，檢測(cè)學(xué)習(xí)和記憶能力。取移植后2w和4w時(shí)大鼠腦組織切片行GFAP、NSE免疫組化染色，觀察移植細(xì)胞的分化情況。 結(jié)論：1.含15％～20％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)可在體外對(duì)HUCBMSCs進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)良好。2.Hoechst33258標(biāo)記的HUCBMSCs植入大鼠腦創(chuàng)傷模型腦內(nèi)后能夠存活，向損傷區(qū)遷移并與宿主腦組織融合在一起。HU