VEGF反義核酸對(duì)胰腺癌增殖及血管生成影響的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文VEGF反義核酸對(duì)胰腺癌增殖及血管生成影響的研究姓名：韓松申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)普通外科指導(dǎo)教師：倪泉興20030506化顯示VEGF反義核酸對(duì)細(xì)胞表面的VEGF也有明顯的抑制作用，而VEGF受體一Flk1的表達(dá)顯著上升。Pearson相關(guān)性分析顯示VEGF陽(yáng)性率與Flk一1陽(yáng)性率呈明顯的負(fù)相關(guān)(P=0017)。研究發(fā)現(xiàn)抑制胰腺癌細(xì)胞VEGF的表達(dá)能降低細(xì)胞Bcl2的表達(dá)。但兩者相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=007

2、4)?？寺⌒纬稍囼?yàn)顯示轉(zhuǎn)染反義表達(dá)質(zhì)粒的胰腺癌細(xì)胞克隆形成率明顯降低，生長(zhǎng)曲線測(cè)定顯示細(xì)胞生長(zhǎng)受到顯著抑制。表明VEGF反義核酸能抑制胰腺癌的單細(xì)胞增殖能力，降低腫瘤細(xì)胞的獨(dú)立生存能力及對(duì)生存環(huán)境的適應(yīng)性。AnnexinVFITC和PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡結(jié)果顯示VEGF反義核酸能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。通過測(cè)定Ecv304生長(zhǎng)曲線，顯示腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液上清促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)作用受到明顯的抑制。體外血管生成試驗(yàn)顯示培養(yǎng)液上清的體外促血管生

3、成活性受到顯著抑制。通過BxPC3胰腺癌細(xì)胞皮下注射的方法，我們成功建立了胰腺癌裸鼠移植瘤模型，并研究了VEGF反義核酸對(duì)胰腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)增殖的影響及移植瘤血管生成的變化。在體內(nèi)研究中，我們觀察了移植瘤體積的變化。裸鼠處死后，稱取移植瘤的重量。瘤體行病理切片，免疫組化染色檢測(cè)VEGF、Flk1、Bcl2表達(dá)變化。HE染色觀察移植瘤血管生成情況，并行血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性Ⅷ因子相關(guān)抗原的免疫組化染色。采用IHS評(píng)分判定VEGF、Flk一1

4、、Bcl2表達(dá)水平，測(cè)定移植瘤微啦管密度(MVD)。體內(nèi)研究結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染VEGFl21反義表達(dá)質(zhì)粒的胰腺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)緩慢，體積最小，最大直徑不超過5mm。免疫組化顯示移植瘤VEGF、FIll、Bcl一2的表達(dá)變化與體外培養(yǎng)條件下類似，即轉(zhuǎn)染反義表達(dá)質(zhì)粒的移植瘤VEGF、Bcl2表達(dá)受抑制，F(xiàn)lk1表達(dá)水平上升。常規(guī)HE染色顯示，轉(zhuǎn)染VEGFl2l反義表達(dá)質(zhì)粒的胰腺癌裸鼠移植瘤包膜下缺乏血管結(jié)構(gòu)，瘤體內(nèi)亦缺乏明顯的血管結(jié)構(gòu)及結(jié)締組織

5、。而對(duì)照組具有豐富的血管結(jié)構(gòu)，尤其以瘤體包膜下及腫瘤結(jié)締組織內(nèi)最為豐富。血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性Ⅷ因子相關(guān)抗原的免疫組化染色顯示對(duì)照組瘤體包膜下及腫瘤結(jié)締組織內(nèi)有豐富的棕黃色陽(yáng)性染色的血管內(nèi)皮細(xì)胞。而轉(zhuǎn)染反義表達(dá)質(zhì)粒的移植瘤則缺乏陽(yáng)性染色的血管內(nèi)皮細(xì)胞，微血管密度顯著下降。總之，研究揭示VEGF反義核酸無論在體外還是在體內(nèi)都能顯著抑制胰腺癌的增殖，誘導(dǎo)凋亡，抑制胰腺癌的血管生成。從而為將來采用VEGF反義核酸對(duì)胰腺癌患者進(jìn)行基因治療積累了理論