先天性肺囊性腺瘤樣畸形中Ki-67、Bcl-2、Bax、GDNF及EGFR的表達(dá)研究.pdf

1、目的： 研究Ki-67、Bcl-2、Bax、GDNF、EGFR在胎肺和CCAM中的表達(dá)，探討其在胎肺發(fā)育中的作用和CCAM病理分型及發(fā)病機(jī)制中的意義。 材料與方法： 選擇我院及浙江省兒童醫(yī)院2000年1月～2008年12月、年齡≤15歲的CCAM患者手術(shù)存檔蠟塊標(biāo)本58例為病例組，其中CCAMⅠ型35例、CCAMⅡ型15例、CCAMⅢ型8例。不同時(shí)期人胚胎正常肺組織15例(假腺期5例、小管期5例、原始肺泡期5例)

2、；同時(shí)以?xún)和７谓M織10例作為對(duì)照組1(CG1)和囊腫周?chē)鄬?duì)正常肺組織10例作為對(duì)照組2(CG2)。所有標(biāo)本經(jīng)HE染色診斷并分組。對(duì)同一批蠟塊采取連續(xù)切片，用免疫組織化學(xué)EliVision法檢測(cè)Ki-67、Bcl-2、Bax、GDNF、EGFR蛋白的表達(dá)，用原位雜交方法檢測(cè)GDNFmRNA的表達(dá)，從甲醛固定石蠟包埋組織中提取GDNF DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后進(jìn)行基因測(cè)序。 結(jié)果： 1.Ki-67在胎肺及CCAM中的表達(dá)

3、 Ki-67蛋白的陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞核內(nèi)，胎肺不同時(shí)期表達(dá)部位和表達(dá)量不同，假腺期和小管期Ki-67的表達(dá)逐漸增多，到了原始肺泡期以后逐漸減弱。在CG1中僅見(jiàn)微弱表達(dá)，低于胎肺(P<0.01)。 CCAM各亞型之間比較，CCAMⅠ型明顯較CCAMⅡ型和CCAMⅢ型高(P<0.01)；CCAMⅡ型和CCAMⅢ型比較沒(méi)有明顯差別(P>0.1)。CCAM中，Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率較CG1和CG2明顯升高(P<0.01)。

4、 2.Bcl-2和Bax在胎肺及CCAM中的表達(dá) Bcl-2和Bax蛋白主要定位于胞漿。胎肺不同時(shí)期表達(dá)部位和表達(dá)量不同，假腺期和小管期表達(dá)逐漸增強(qiáng)，原始肺泡期以后表達(dá)逐漸減弱。胎肺中Bcl-2在假腺期上皮細(xì)胞和三個(gè)時(shí)期的間質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)均低于CG1(P<0.05)。Bax在假腺期主要表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞，到了小管期轉(zhuǎn)移至支氣管上皮細(xì)胞中。 CCAM中，CCAMⅠ型較CCAMⅡ型、Ⅲ型高(P<0.01)；CCAMⅡ型和Ⅲ型比

5、較沒(méi)有明顯差別(P>0.1)。CCAM各亞型均低于CG1，且均具有顯著性差異(P<0.05)。 3.Bax/Bcl-2在胎肺及CCAM中的比較 胎肺各期之間比較，Bax/Bcl-2的比值在假腺期和小管期隨著妊娠周數(shù)的增加逐漸升高，到原始肺泡期以后逐漸降低。上皮細(xì)胞中，小管期高于假腺期和CG1(P<0.05)。間質(zhì)細(xì)胞中，胎肺假腺期和小管期均顯著高于CG1(P<0.01)。 CCAM中，各亞型均高于CG1和CG2

6、(P<0.01)。用直線相關(guān)分析Bax/Bcl-2的比值與Ki-67蛋白在CCAM中的關(guān)系，R=-0.593， P<0.01，二者呈顯著負(fù)相關(guān)。 4.GDNF蛋白和GDNFmRNA在胎肺及CCAM中的表達(dá) GDNF蛋白和GDNFmRNA的陽(yáng)性表達(dá)位于胞漿，胎肺中的表達(dá)均高于CG1，但僅小管期有顯著性差別(P<0.05)；胎肺各個(gè)時(shí)期比較表達(dá)均不同，在假腺期和小管期表達(dá)逐漸增強(qiáng)，到原始肺泡期后逐漸減弱。在CG1中GDNF

7、的表達(dá)極其微弱。 CCAM中，GDNF蛋白和GDNFmRNA在囊壁的陽(yáng)性定位主要表達(dá)于胞漿，部分為核漿型。CCAM不同組織亞型表達(dá)強(qiáng)度均不同，CCAMⅠ型強(qiáng)于CCAMⅡ和Ⅲ型(P<0.01)，CCAMⅡ型強(qiáng)于CCAMⅢ型(P<0.01) CCAM高于CG1和CG2(P<0.01)。在CCAMⅢ型以及CG1和CG2中，GDNFmRNA僅表達(dá)于囊壁平滑肌及血管平滑肌中，上皮中未見(jiàn)有表達(dá)。CCAM中，未發(fā)現(xiàn)有GDNF基因表達(dá)的異常。

8、 用直線相關(guān)分析GDNF蛋白與Ki-67蛋白及GDNF蛋白與Bcl-2蛋白在CCAM中表達(dá)的關(guān)系，分別R=0.559， P<0.01； R=0.699，P<0.01，均呈顯著正相關(guān)。 5.EGFR蛋白在胎肺及CCAM中的表達(dá) EGFR蛋白主要定位于細(xì)胞漿內(nèi)。胎肺小管期和原始肺泡期均高于CG1(P<0.05)；胎肺各個(gè)時(shí)期相互比較，在假腺期和小管期隨著妊娠周數(shù)的增加逐漸升高，到原始肺泡期以后逐漸降低，不同時(shí)期表達(dá)

9、部位也有所不同。 CCAM中，EGFR的表達(dá)明顯高于CG1和CG2(P<0.01)。CCAM各亞型比較，CCAMⅠ型明顯強(qiáng)于CCAMⅡ型和Ⅲ型(P<0.01)。用直線相關(guān)分析EGFR蛋白與Ki-67蛋白以及EGFR蛋白與GDNF蛋白在CCAM中的表達(dá)的關(guān)系，分別R=0.908， P<0.01；R=0.904， P<0.01，二者均呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論： 1.細(xì)胞增殖和凋亡這兩個(gè)截然相反的行為，在胎肺發(fā)育過(guò)程中同

10、時(shí)存在，并且保持著平衡，使胎肺在特定的時(shí)空得以正常發(fā)育。 2.GDNF和EGFR這兩種蛋白都參與了胎肺組織的生長(zhǎng)發(fā)育，且在不同時(shí)期發(fā)揮不同的作用。 3.CCAM是細(xì)胞增殖和凋亡失調(diào)的結(jié)果，其形成和GDNF基因表達(dá)異?？赡軣o(wú)關(guān)。 4.GDNF和EGFR可以作為診斷CCAM的一個(gè)依據(jù)和CCAM分型的一個(gè)參考指標(biāo)。 5.CCAM是一種類(lèi)腫瘤疾病，CCAMⅠ型可能具有惡性轉(zhuǎn)化的傾向。 6.GDNF和EGF