健脾清化方干預(yù)干擾素抗丙肝病毒作用的體外研究及對(duì)脂質(zhì)代謝的影響.pdf

1、目的：本課題擬通過體外觀察健脾清化方對(duì)丙型肝炎病毒（HCV）人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞上清中載脂蛋白B(ApoB)、極低密度脂蛋白（VLDL）、甘油三酯（TG）的影響，科學(xué)客觀的分析健脾清化方干預(yù)干擾素抗丙肝病毒的作用機(jī)制。為中醫(yī)藥治療慢性丙型肝炎提供新的思路和視角。
　　方法：(1)購買HepG2細(xì)胞株及SPF級(jí)SD雄性大鼠40只，采用隨機(jī)分組的方法將SD大鼠分為四組即中藥組、西藥組、聯(lián)合組及空白組，每組10只，前三組分別給予健

2、脾清化方灌胃、干擾素皮下注射加利巴韋林灌胃、健脾清化方灌胃加干擾素皮下注射加利巴韋林灌胃，對(duì)照組給予同等體積的生理鹽水灌胃，10天后取大鼠血清，制作出四組大鼠含藥血清。(2)選取慢性丙型肝炎患者的血清，培養(yǎng)出丙肝病毒(HCV)感染的HepG2細(xì)胞。(3)四組大鼠含藥血清分別干預(yù)丙肝病毒HCV感染的HepG2細(xì)胞。(4)于丙肝病毒（HCV）感染后和藥物血清干預(yù)后48h、96h、144h、192h后分別收集細(xì)胞及上清，采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反

3、應(yīng)法（RT-PCR法）檢測HepG2細(xì)胞中的丙肝病毒載量，用ELISA法檢測HepG2細(xì)胞上清中ApoB、VLDL、TG含量的變化。通過各組檢測的結(jié)果分析健脾清化方干預(yù)干擾素抗丙肝病毒的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：RT-PCR法檢測細(xì)胞及上清中HCV-RNA正負(fù)鏈陽性，提示造模成功。結(jié)果顯示：(1)對(duì)HepG2細(xì)胞上清中脂質(zhì)的影響：造模前即空白組與造模后即對(duì)照組ApoB、VLDL、TG含量比較，三種脂質(zhì)在兩個(gè)不同組別間均有顯著差異，且線

4、圖顯示三種脂質(zhì)與空白組相比均呈不同程度的下降趨勢，提示對(duì)照組即丙肝病毒感染后 HepG2細(xì)胞上清中ApoB、VLDL、TG含量較空白組減少。含藥血清干預(yù)后測得ApoB、VLDL、TG含量在48h、96h、144h中的不同組別間無顯著差異，P大于0.05；在192h中P小于0.05，四組間存在顯著差異，且中藥組、聯(lián)合組與對(duì)照組相比 P值均小于0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而西藥組與對(duì)照組相比 P大于0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且線圖顯示四組隨著時(shí)

5、間的延長均呈不同程度的下降趨勢，其中對(duì)照組下降最為明顯，依次為中藥組、西藥組。提示聯(lián)合組對(duì) ApoB、VLDL、TG含量的影響最為明顯，其次是中藥組，西藥組無明顯影響。（2）對(duì)丙肝病毒感染HepG2細(xì)胞中HCV-RNA滴度即丙肝病毒載量的影響：HCV-RNA滴度在144h、192h中四組間比較有顯著差異，且144h中聯(lián)合組與中藥組、西藥組對(duì)照組間存在顯著差異；在192h中中藥組與西藥組、聯(lián)合組之間，聯(lián)合組與西藥組、對(duì)照組之間有顯著性差異

6、。線圖顯示中藥組、西藥組、聯(lián)合組及對(duì)照組均呈不同程度的上升趨勢，其中對(duì)照組上升最明顯；依次為中藥組、西藥組；聯(lián)合組最低。綜合檢驗(yàn)及線圖分析聯(lián)合組對(duì)HCV-RNA滴度影響最大，其次為西藥組，中藥組無明顯影響。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)研究表明(1)對(duì)照組即丙肝病毒感染后HepG2細(xì)胞上清中ApoB、VLDL、TG含量減少，且與時(shí)間呈正相關(guān)，與丙肝病毒載量呈負(fù)相關(guān)。（2）健脾清化方對(duì)丙肝病毒感染的HepG2細(xì)胞上清中ApoB、VLDL、TG含