辣木多糖的提取與體外抗丙肝病毒活性的研究.pdf

1、辣木(Moringa Oleifera)，又名鼓槌樹，屬于木本植物，不僅可以直接食用，且經(jīng)過加工處理后還可以制成保健品、化妝品等，還被許多實(shí)驗(yàn)人員作為試驗(yàn)材料進(jìn)行研究。辣木的營(yíng)養(yǎng)成分豐富，主要有鈣、鐵、多糖、黃酮等，其中多糖屬于辣木的主要活性成分之一。研究發(fā)現(xiàn)多糖主要分為動(dòng)物多糖、植物多糖和微生物多糖三種，具有抗病毒、抗腫瘤等生物活性，并且具備毒性低、來源廣、易制備等優(yōu)點(diǎn)，可以作為一種理想的天然藥物和功能性食品進(jìn)行開發(fā)利用。
　　

2、丙型肝炎病毒(HCV)屬于黃病毒科，全球感染人數(shù)逐年上升，嚴(yán)重威脅人類的健康。目前，HCV治療方案的療效低、副作用大，且針對(duì)HCV的疫苗依舊處于空白階段。盡管國(guó)內(nèi)外關(guān)于多糖活性的研究報(bào)道很多，如山藥多糖抗細(xì)小病毒、扇貝多糖抗乙肝病毒等，但是針對(duì)辣木及其多糖的研究卻鮮有報(bào)道，目前僅僅是局限在辣木成分的提取和分離上，尚未開展關(guān)于辣木多糖抗病毒活性等方面的研究，更沒有其抗丙肝病毒的研究。本文以辣木為原料，系統(tǒng)地研究了辣木多糖的提取、分離和純化

3、，并用WST-1法和熒光定量PCR法對(duì)其抗丙肝病毒的生物活性和作用方式進(jìn)行了初步探討。
　　1、辣木多糖的提取、純化。本試驗(yàn)采用熱水提取法，提取工藝:提取料液比1∶10，浸提溫度80℃，提取時(shí)間為90min，提取次數(shù)3次，并用DEAE Sepharose Fast Flow快速流纖維柱對(duì)溶解于濃度為0.1mol/L～1mol/L NaCl的辣木多糖進(jìn)行分離純化，分別考察了Sevage法、三氯乙酸法和酶解法三種除蛋白質(zhì)方法的純化效果

4、，優(yōu)化了提取工藝，并用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖的含量。研究證明:Sevage法去除蛋白質(zhì)所得到的辣木多糖，外觀上深黃色、塊狀、不易溶于熱水中，多糖含量為29.5％;三氯乙酸法去除蛋白質(zhì)所得到的多糖，外觀上黃白色、粉末狀、較易溶于熱水中，多糖含量為31.6％;酶解法所得多糖，外觀上淺黃色、棉花樣、極易溶于冷水中，多糖含量為39.5％。以上三種方法所得到的多糖均易返潮，需注意干燥保存。Sevage法去除蛋白質(zhì)試劑浪費(fèi)嚴(yán)重，并且多糖會(huì)隨著蛋白質(zhì)一

5、起流失，導(dǎo)致多糖大量損失;三氯乙酸法去除蛋白質(zhì)多糖容易發(fā)生降解;酶解法輔助熱水提取多糖，多糖不容易發(fā)生降解，并且可以保持較高的活性，還能夠顯著提高多糖的含量，是一種較為理想的多糖提取方法。
　　2、辣木多糖的抗病毒活性研究。本試驗(yàn)采用體外細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)辣木多糖抗丙肝病毒的活性進(jìn)行研究。用水溶性四唑鹽法(WST-1法)測(cè)定多糖對(duì)人肝癌細(xì)胞(Huh7.5.1)的細(xì)胞毒性作用，利用熒光定量PCR法，探討辣木多糖的抗病毒活性，并且采用三種不

6、同的接種方式，即先加多糖后加病毒、先加病毒后加多糖、病毒多糖同時(shí)作用，初步研究辣木多糖抗病毒的作用方式。結(jié)果表明，在WST-1試驗(yàn)中得出濃度在7.8μg/mL～125μg/mL范圍內(nèi)，辣木多糖對(duì)Huh7.5.1細(xì)胞無毒性作用，即安全濃度范圍。運(yùn)用熒光PCR法測(cè)定得到辣木多糖對(duì)HCV有一定的抗病毒活性，同時(shí)采用先加多糖后加病毒的作用方式優(yōu)于其他兩種方式，并且多糖的最適濃度為62.5μg/mL，存在一定的濃度依賴性，即加入的多糖濃度越大，抗