感毒清口崩片防治呼吸道病毒感染藥效及免疫機(jī)理研究.pdf

1、本論文在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，結(jié)合長期臨床實(shí)踐和現(xiàn)代藥理研究制成感毒清口崩片。在完成感毒清制劑工藝路線、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及急性毒理學(xué)研究的基礎(chǔ)上，對其相關(guān)主要藥效和免疫作用機(jī)理進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。 目的： 觀察感毒清對流感病毒FMl致小鼠病毒性肺炎的抗病毒及抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛作用；探討感毒清對流感病毒FMl致小鼠病毒性肺炎的細(xì)胞免疫作用機(jī)理，為進(jìn)一步的臨床研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.以小鼠經(jīng)鼻吸入流感病毒

2、亞洲甲型鼠肺適應(yīng)株(FMl)復(fù)制小鼠病毒性肺炎模型，采用感毒清高、中、低劑量治療5天，同時(shí)設(shè)立西藥利巴韋林、中藥蓮花清瘟陽性對照及正?？瞻讓φ铡Ｓ^察①死亡保護(hù)作用；②肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率；③肺組織病理形態(tài)學(xué)改變；④胸腺及脾指數(shù)。2.采用2,4-二硝基苯酚致大鼠和內(nèi)毒素所致家兔發(fā)熱模型，觀察感毒清的體溫變化；3.采用二甲苯所致小鼠耳廓腫和脹蛋清所致大鼠足腫脹模型，計(jì)算腫脹度及腫脹抑制率；4.采用小鼠熱刺激致痛和小鼠化學(xué)刺激致痛模型，計(jì)算痛

3、閾值；5.采用雙抗夾心ELISA法，檢測流感病毒感染小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-10含量；6.采用SABC免疫組織化學(xué)法檢測流感病毒感染小鼠肺組織石蠟切片中細(xì)胞因子TNF-α、ICAM-l、NF-KBP65的表達(dá)和脾臟T淋巴細(xì)胞亞群的影響。 結(jié)果： 1.主要藥效研究結(jié)果 (1)感染病毒后14d內(nèi)，小鼠死亡率明顯下降，并呈一定量效關(guān)系。其中感毒清高、中、低劑量組小鼠死亡率與模型組比較有顯著性差異(P

4、<0.001或P<0.05)。 (2)治療組中感毒清高、中、低劑量組肺指數(shù)均顯著低于病毒感染對照組(P<0.01)：與利巴韋林對照組比較無明顯差異(P>0.05)。(3)①感毒清高、中、低劑量組與病毒感染模型組比較肺部大體病變均有不同程度的減輕；②光鏡下感毒清高、中、低劑量組較大改善或減輕較重的間質(zhì)性肺炎病變，以高劑量組為顯著；對各組標(biāo)本就其病變程度進(jìn)行半定量分析。結(jié)果顯示，感毒清治療組和利巴韋寧治療組較病毒感染模型組病變明顯減

5、輕(P<0.05)。(4)①感毒清高、中、低劑量組及其他各實(shí)驗(yàn)組對小鼠感染流感病毒后脾指數(shù)無明顯影響(P＞0.05)。②感毒清中、低劑量組、蓮花清瘟組及利巴韋林組對流感病毒感染小鼠胸腺縮小無明顯改善(P＞0.05)；感毒清高劑量組較病毒感染模型組的胸腺指數(shù)明顯增加(P＜0.05)。(5)①注射內(nèi)毒素家兔給藥后1h～4h感毒清大劑量組兔體溫升高受到抑制并下降，與空白對照組相比有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05)。感毒清中劑量組兔體溫

6、在2h～3h內(nèi)用藥后體溫下降也較空白對照組顯著(P＜0.05)：②給予高、中劑量感毒清組的2，4-二硝基苯酚致熱大鼠體溫明顯抑制且迅速消退，其中以中劑量組最為明顯。(6)①二甲苯致小鼠耳腫脹程度明顯降低，與正?？瞻捉M相比有顯著性差異(P＜0.05)。②感毒清各劑量組大鼠足趾注射蛋清后30min～90min內(nèi)腳趾腫脹程度受到明顯抑制(P＜0.01，P＜0.05)。以感毒清高劑量組60min最為明顯，大鼠足腫脹度明顯低于模型對照組(P＜0.

7、001)。(3)①感毒清高劑量組小鼠的熱板測定痛閾值明顯提高(P＜0.05)。至60min痛閾值則更加明顯提高(P＜0.01)。②感毒清高、中劑量組小鼠對O.9％冰醋酸誘發(fā)扭體反應(yīng)次數(shù)明顯減少，扭體反應(yīng)抑制率分別為11.63％、6.69％，與正常空白對照組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。 2．免疫機(jī)理研究結(jié)果(1)感毒清高、中、低劑量組及陽性藥對照利巴韋林組和蓮花清瘟組能使小鼠血清IFN-γ含量升高；與病毒感染模型組比較有非

8、常顯著性差異(P＜0.01)。(2)感毒清高、中、低劑量組及陽性藥對照利巴韋林組和蓮花清瘟組能使小鼠血清IL-10含量進(jìn)一步升高，與病毒感染模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)。(3)通過圖像定量分析，與模型對照組比較，感毒清高劑量組、中劑量組能顯著降低FMl感染小鼠肺組織中TNF-α含量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)：感毒清低劑量組對TNF-α有一定的抑制趨勢，但與模型對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(4)模型對照組小鼠肺組

9、織細(xì)胞漿及胞核內(nèi)見分布均勻的大量棕色顆粒，且大多數(shù)己進(jìn)入細(xì)胞核。模型組NF-KB P65顯著高于空白組(P＜0.01)；感毒清高、中、低劑量組和利巴韋林、蓮花清瘟組NF-KB p65的活化程度(棕色顆粒)明顯少于模型組(P＜O.01)。(5)病毒感染對照組CD<，4>顯著低于正常空白對照組(P＜0.001)，而CD<,8>顯著高于正?？瞻讓φ战M(P＜0.001)，CD<,4>/CD<,8>則明顯低于正?？瞻讓φ战M(P＜0.001)。感毒

10、清高、中、低劑量組及陽性藥對照蓮花清瘟組則能升高CD<,4>，降低CD<,8>，提高CD<,4>／CD<,8>比值：與病毒感染對照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0,001。利巴韋林明顯升高CD4，降低CD<,8>(P<0.01)，但CD<,4>／CD<,8>無明顯變化(P>0.05)。 結(jié)論:感毒清對流感病毒感染小鼠FMl所致病毒性肺炎有較好的治療和預(yù)防作用。藥效學(xué)研究表明感毒清有抗病毒、解熱、抗炎和鎮(zhèn)痛的作用，可減輕肺組織的損傷，