人外周血單個(gè)核細(xì)胞體外誘導(dǎo)成為破骨細(xì)胞樣細(xì)胞及鑒定.pdf

1、目的：探討可行的獲取人破骨細(xì)胞樣細(xì)胞以供進(jìn)一步研究的方法。 方法：從健康志愿者抽取外周靜脈血，以密度梯度離心方法獲得單個(gè)核細(xì)胞，在預(yù)先種植了UMR106細(xì)胞的蓋玻片及骨片上，用含1，25(OH)2D3、地塞米松和M-CSF的DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，而在未種植UMR106細(xì)胞的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng)者作為對照組。每3-4天更換一次培養(yǎng)液并進(jìn)行觀察。培養(yǎng)至20天，蓋玻片上培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶染色鑒定，以含有至少3個(gè)核且抗酒石酸

2、酸性磷酸酶染色陽性者為破骨細(xì)胞樣細(xì)胞。骨片上培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色及電鏡掃描鑒定。 結(jié)果：培養(yǎng)第3天，大部分的單個(gè)核細(xì)胞貼壁，培養(yǎng)第7天，單個(gè)核細(xì)胞呈伸展?fàn)顟B(tài)，部分呈多角形，部分細(xì)胞胞漿內(nèi)顆粒增多，細(xì)胞的形態(tài)變化與胞漿內(nèi)顆粒增多并不一致，培養(yǎng)第10天，實(shí)驗(yàn)組部分細(xì)胞體積較前明顯增大，胞漿內(nèi)顆粒進(jìn)一步增多，少許細(xì)胞出現(xiàn)多核。對照組單個(gè)核細(xì)胞僅有少數(shù)變成多角形或梭形，細(xì)胞體積增大及胞漿顆粒增多現(xiàn)象較少。培養(yǎng)第13天，實(shí)驗(yàn)組中體積

3、有變化者進(jìn)一步增大，細(xì)胞顆粒進(jìn)一步增多，未出現(xiàn)此類表現(xiàn)者無明顯變化；對照組變化不明顯。在第20天，實(shí)驗(yàn)組有3％的細(xì)胞變?yōu)榘w較大的多核細(xì)胞(MNC)且抗酒石酸酸性磷酸酶染色陽性，甲苯胺藍(lán)染色及掃描電鏡(SEM)檢查發(fā)現(xiàn)骨磨片上有吸收陷窩形成，SEM發(fā)現(xiàn)骨磨片上出現(xiàn)有偽足、多核的巨噬細(xì)胞；而對照組沒有出現(xiàn)多核巨噬細(xì)胞，沒有出現(xiàn)抗酒石酸酸性磷酸酶染色陽性細(xì)胞。 結(jié)論：在1，25(OH)2D3、地塞米松和M-CSF存在下，人外周血單個(gè)