綠茶多酚對甲醛致內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC-12)損傷的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的:觀察甲醛對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC-12)的影響,初步探討甲醛在心血管疾病發(fā)病中的作用機(jī)制;觀察綠茶多酚(GTP)預(yù)處理對甲醛所致?lián)p傷的影響,研究其可能的作用機(jī)制,為茶多酚防治心血管疾病提供實驗依據(jù)。
　　方法:1.甲醛對體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC-12)的損傷及其機(jī)制研究:體外常規(guī)培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞,取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實驗。分正常對照組和甲醛損傷組(終濃度為0.05mmol/L,0.1mmol/L

2、,1.0mmol/L)加藥后培養(yǎng)4h。應(yīng)用透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,分光光度法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD活力,LDH、MDA、以及細(xì)胞內(nèi)GSH含量的變化,反映甲醛對細(xì)胞氧化/抗氧化系統(tǒng)的影響,硝酸還原酶法檢測NO濃度的變化,并應(yīng)用SP試劑盒檢測細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB蛋白表達(dá)水平的變化。以0.1mmol/L甲醛組為研究對象,培養(yǎng)0h、2h、4h、6h、8h,檢測上述各項指標(biāo),分析甲醛損傷內(nèi)皮細(xì)胞的時效關(guān)系。2.綠茶多酚對甲醛致 HUVEC

3、-12損傷的保護(hù)及其機(jī)制研究:設(shè)正常細(xì)胞組、甲醛損傷組(0.1mmol/L)、綠茶多酚組(2.5mg/L,5mg/L,10mg/L,20mg/L)。其中綠茶多酚先與細(xì)胞預(yù)孵12h后加入甲醛(終濃度0.1mmol/L)置CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h,檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD活力,LDH、MDA、NO以及細(xì)胞內(nèi)GSH含量,SP試劑盒檢測NF-κB。
　　結(jié)果:1.甲醛可造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷,導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂,LDH釋放增多;2.甲醛可致MDA增加,G

4、SH減少,SOD活力減弱,與對照相比,其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);3.甲醛組NO含量明顯高于對照組,差異有顯著性(P<0.01);4.甲醛組NF-κB的活力高于對照組;5.綠茶多酚組LDH、MDA、NO含量低于甲醛組(0.1mmol/L),而SOD活力,GSH含量高于甲醛組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);NF-κB的活力與甲醛組相比明顯下降。綠茶多酚各組間比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論: