影響羥基磷灰石納米顆粒DNA轉(zhuǎn)染率因素的研究.pdf

1、目的:研究羥基磷灰石納米顆粒介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染的影響因素。
　　 方法:觀察聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)等表面活性劑處理的羥基磷灰石納米顆粒(nanoparticle hydroxyapatite,簡(jiǎn)稱(chēng)nHA)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)PEI-nHA)混懸液在室溫下的懸浮穩(wěn)定性;用PEI-nHA與攜帶CX26基因的質(zhì)粒DNA形成的復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染過(guò)程中,通過(guò)分別改變四個(gè)重要實(shí)驗(yàn)條件(PEI-nHA濃度、DNA

2、量、細(xì)胞接種數(shù)量、共轉(zhuǎn)染時(shí)間)的參數(shù),觀察基因轉(zhuǎn)染效率的變化;不同的基因載體(未經(jīng)修飾的nHA、PEI-nHA、PEI)與攜帶CX26基因的質(zhì)粒DNA形成的復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,觀察轉(zhuǎn)染效率。
　　 結(jié)果:PEI-nHA配置成不同濃度的混懸液在室溫下靜置24小時(shí)后觀察,具有良好的懸浮穩(wěn)定性。靜置2個(gè)月后觀察,濃度為≥1000μg/ml的PEI-nHA懸浮穩(wěn)定性良好,濃度≤500μg/ml的可見(jiàn)分層。PEI-nHA轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA

3、研究結(jié)果:1)PEI-nHA最佳濃度為250μg/ml;2)DNA最佳量為2μg;3)Hela細(xì)胞接種按4x105計(jì)數(shù)較適宜;4)共轉(zhuǎn)染最佳時(shí)間為6小時(shí)。未經(jīng)修飾的nHA轉(zhuǎn)染率在10％左右;PEI-nHA的轉(zhuǎn)染率在28％左右;PEI的轉(zhuǎn)染率在55％左右。
　　 結(jié)論:1.經(jīng)PEI修飾后的nHA載體具有良好的分散性和懸浮穩(wěn)定性;高濃度的PEI-nHA懸浮穩(wěn)定性較低濃度的PEI-nHA;懸浮穩(wěn)定性好,提示液相PEI-nHA應(yīng)以高濃度