帶CNTF及GDNF的神經(jīng)導(dǎo)管橋接大鼠面神經(jīng)總干對(duì)神經(jīng)的誘向再生作用.pdf

1、面神經(jīng)吻合后常常產(chǎn)生聯(lián)帶運(yùn)動(dòng)，這種現(xiàn)象是因?yàn)槊嫔窠?jīng)再生過(guò)程中不同功能的神經(jīng)纖維錯(cuò)向再生所致。為了改善面神經(jīng)修復(fù)的效果，人們進(jìn)行了很多研究，利用營(yíng)養(yǎng)因子改善神經(jīng)再生微環(huán)境、利用神經(jīng)導(dǎo)管引導(dǎo)再生方向是兩條重要的途徑。
　　 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是由神經(jīng)靶組織、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)微環(huán)境產(chǎn)生的一些多肽或蛋白質(zhì)，對(duì)于神經(jīng)的生存、分化、軸突生長(zhǎng)和維持各種功能至關(guān)重要。有的因子對(duì)神經(jīng)軸突的生長(zhǎng)有誘導(dǎo)作用，而有的則呈抑制作用。神經(jīng)軸突的生長(zhǎng)就是在多種因

2、子的調(diào)節(jié)下向前延伸。我們的前期研究表明，外源性的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)——因子睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)，不但能促進(jìn)軸突芽生、運(yùn)動(dòng)終板再生，而且對(duì)喉返神經(jīng)有明顯的減少錯(cuò)向再生的作用，從而對(duì)神經(jīng)的再生起誘導(dǎo)作用。神經(jīng)導(dǎo)管因其不需供體、可以防止周圍疤痕組織長(zhǎng)入、導(dǎo)向作用、可添加輔助因子等優(yōu)勢(shì)，而受廣泛關(guān)注。因此，為了明確這兩種營(yíng)養(yǎng)因子的確切作用，我們借助可降解的PLGA/殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管，進(jìn)行了如下研究：
　　 一、在明確大鼠面神經(jīng)及面神經(jīng)核的解

3、剖情況下，探討并建立了有效的神經(jīng)示蹤方法，為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。首先對(duì)大鼠的面神經(jīng)進(jìn)行全程解剖，結(jié)果表明：大鼠面神經(jīng)各顱外分支均位于肌肉表面，350g左右大鼠的面神經(jīng)主干自莖乳孔出顱，于腮腺后緣分出各主要分支，此段的主干長(zhǎng)度為4.21±0.29mm，面神經(jīng)主干的直徑為0.73±0.07mm，這些數(shù)據(jù)為選擇合適的神經(jīng)導(dǎo)管和手術(shù)部位提供了依據(jù)。大鼠面神經(jīng)核位于腦干中，于雙耳間連線后約1.60±0.17mm始，向后延伸，縱徑為1.65±0.0

4、5mm，橫徑為1.62±0.10mm。之后，應(yīng)用三種示蹤劑DiI、FG、TB標(biāo)記面神經(jīng)頰支進(jìn)行標(biāo)記，分析三種示蹤劑的異同，發(fā)現(xiàn)三種示蹤劑標(biāo)記的神經(jīng)數(shù)目上沒(méi)有顯著區(qū)別，P=0.761，但真藍(lán)的運(yùn)輸速度要較另外兩種要快，且其彌散情況稍重。此外，三種示蹤劑的抗淬滅能力均較強(qiáng)，常溫避光保存下三個(gè)月后仍可見(jiàn)明亮的熒光。在頰支上用DiI比較示蹤劑使用的三種方法：肌肉注射法、神經(jīng)斷端涂抹法和神經(jīng)揉搓半切注入法，結(jié)果表明，肌肉注射法與后兩種方法差異顯著

5、，LSD法兩兩比較P值均為零，而后兩種方法間無(wú)顯著差異，P值為0.672。與標(biāo)準(zhǔn)方法、即神經(jīng)斷端涂抹法相比，神經(jīng)揉搓法在保留部分神經(jīng)功能、減少熒光染料使用及減輕熒光背景方面有明顯的優(yōu)勢(shì)，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中可資推廣。
　　 二、用含CNTF、GDNF營(yíng)養(yǎng)因子的復(fù)合PLGA/殼聚糖可降解神經(jīng)導(dǎo)管橋接成年SD大鼠面神經(jīng)主干，術(shù)后第45天用DiI和TB分別標(biāo)記術(shù)側(cè)的面神經(jīng)顴支和頰支，第52天處死大鼠，計(jì)算雙標(biāo)神經(jīng)元及錯(cuò)位的神經(jīng)元占所有再生的顴

6、支和頰支再生神經(jīng)元的比例，及大鼠術(shù)側(cè)面神經(jīng)最大誘發(fā)電位占健側(cè)的比例，分析這兩種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)神經(jīng)再生的誘導(dǎo)作用。結(jié)果表明，對(duì)照組錯(cuò)向再生細(xì)胞數(shù)占總再生細(xì)胞數(shù)的比例平均為17.98％，CNTF組為13.48％，GDNF組為14.24％，三組相比，CNTF組、GDNF組的錯(cuò)向率明顯小于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01)；而CNTF與GDNF組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。三組動(dòng)物術(shù)側(cè)面神經(jīng)最大誘發(fā)電位占健側(cè)百分率的平均值