Bmi-1和Mel-18基因在MG-132誘導的人HL-60細胞系凋亡中的表達變化.pdf

1、目的：Bmi-1和Mel-18都屬于Polycombgroup(Pc-G)基因家族的成員，該基因家族在機體形成，造血和控制細胞周期上發(fā)揮關鍵的作用。Bmi-1作為一種癌基因，其表達不僅為正常造血干細胞(HSC)自我更新所必需，也決定著HSC和白血病干細胞(LSC)的增生能力。而Mel-18作為一種可能的抑癌基因，在動物實驗中能負調控HSC的自我更新能力，并可影響HSC的細胞周期狀態(tài)。NF-κB于原代白血病細胞中組成性激活，抑制其活性能誘

2、導明顯凋亡的發(fā)生。目前在人淋巴瘤的研究中發(fā)現(xiàn)Bmi-1和Mel-18均與NF-κB有明顯的統(tǒng)計學聯(lián)系；而小鼠中Mel-18的啟動子上游存在NF-κB的潛在結合位點。MG-132為一種蛋白酶體(Proteasome)抑制劑，能夠選擇性抑制NF-κB活性，從而誘導白血病細胞的凋亡。本實驗主要研究Bmi-1和Mel-18在人急性髓系白血病細胞株HL-60凋亡過程中的表達變化，探討其與細胞凋亡的關系。 方法：將HL-60細胞與一定濃度M

3、G-132進行聯(lián)合培養(yǎng)后，按6h，9h，12h時間點提取樣本和對照組進行Real-TimeRT-PCR檢測Bmi-1和Mel-18基因的表達水平，同時用流式細胞儀檢測細胞凋亡狀況；另于培養(yǎng)后12h用NF-κB抗體處理樣本，于共聚焦顯微鏡下確認NF-κB受抑制情況，同時進行初步的細胞周期流式檢測。 結果：處理前Mel-18表達位于較低水平，而Bmi-1水平較高，處理后Mel-18表達水平隨時間逐漸明顯上調，而Bmi-1水平未見明顯