半夏的組織培養(yǎng)和人工種子研究及其指紋圖譜初探.pdf

1、為了有效解決半夏種苗快速繁殖和對不同產地來源的半夏進行有效鑒別，本實驗以傳統(tǒng)中藥材—天南星科植物半夏Pinellia ternate (Thunb.) Breit為材料，對半夏的組織培養(yǎng)技術、人工種子的制作流程及人工胚乳、播種條件、貯藏條件等進行了研究，同時對不同產地半夏的指紋圖譜的建立進行了研究。主要結果如下： 1．通過半夏葉的不同部位誘導愈傷組織獲得半夏無菌試管苗，建立起了半夏組織培養(yǎng)快速繁殖體系。結果表明：半夏葉柄基部在M

2、S+2,4-D 0.2 mg/L+ KT 1.0 mg/L的培養(yǎng)基上誘導出的愈傷組織效果最好；愈傷組織在MS+2,4-D 0.5 mg/L + KT 1.0 mg/L+ABA 0.5 mg/L+AC 0.4 g/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)可提高愈傷組織的增殖率，并降低褐變率。 2．通過在愈傷組織的誘導和分化過程中分別加入不同濃度的多效唑和B9的實驗結果表明，多效唑是半夏壯苗培養(yǎng)有效的外源調節(jié)物質。通過對不同多效唑濃度下培養(yǎng)苗生物學性狀的

3、比較，結果顯示，低濃度的多效唑有利于組培苗的矮化和壯苗，高濃度的多效唑抑制半夏組織培苗的正常生長。其最佳矮化和壯苗培養(yǎng)基為MS+2,4-D 0.5 mg/L + KT 1.0 mg/L+多效唑0.6 mg/L。在所選B9的濃度中對半夏愈傷組織的誘導和分化影響不大，各個濃度B9的分化率與對照基本都無顯著差異。 3．進行了半夏人工種子制作流程、人工種皮、人工胚乳、播種條件、貯藏條件等方面的研究。結果表明：從半夏愈傷組織表面切取2-3

4、 mm小塊莖，包埋在3％海藻酸鈉里，滴入2％ CaCl2中反應15-20 min，用1/2MS培養(yǎng)液配制人工胚乳，直接播種在鋪有浸潤濾紙的培養(yǎng)皿中萌發(fā)，萌發(fā)率可達76％。在人工胚乳中添加多菌靈，有助于提高半夏人工種子在有菌條件下的萌發(fā)率。4℃下貯存的人工種子30d內發(fā)芽率可達45.7％。 4．通過收集不同產地的半夏藥材樣品及其常見替用品和偽品，建立了半夏藥材的高效液相色譜指紋圖譜的研究方法。確定了指紋圖譜的測定條件，色譜柱：Ag

5、ilent ZORBAX SB-C18 (5 μm,4.6×250 mm)；流動相：A 95％甲醇，B 純水；線性梯度洗脫：0.01-5 min 100％ B，5-10 min 100％-98％ B，10-30 min 98％-90％ B，30-70 min 90％-0％ B；流速：1.0 mg/L；檢測波長：254 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μl。通過分析指紋圖譜，確定了21個峰為半夏藥材指紋圖譜的共有峰，構成該藥材特有的色