鐵過載對骨髓Coombs試驗陽性全血細胞減少癥患者骨髓損傷的機制研究.pdf

1、目的:
　　 探索鐵過載對骨髓單個核細胞(BMMNC) coombs試驗陽性全血細胞減少癥（又稱免疫相關(guān)性全血細胞減少癥，IRP）患者骨髓造血損傷的機制。
　　 方法:
　　 1.采用流式細胞術(shù)檢測21例鐵過載IRP患者、26例非鐵過載IRP患者及10名正常對照者BMMNC活性氧自由基(ROS)、Bcl-2、Caspase-3的表達水平及凋亡率。
　　 2.鐵過載IRP患者BMMNC經(jīng)含5 mmol/L

2、N-乙酰半胱氨酸(NAC)的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后，采用流式細胞術(shù)測定鐵過載IRP患者BMMNC經(jīng)NAC處理前后ROS、Bcl-2、Caspase-3的表達水平及凋亡率的變化。
　　 3.采用流式細胞術(shù)檢測47例IRP患者外周血CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞數(shù)量及比例，骨髓CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞凋亡率。
　　 4.采用流式細胞術(shù)檢測骨髓紅系GlyCoA自身抗體陽性IRP患者骨髓紅系凋亡

3、率，比較鐵過載組與非鐵過載組紅系凋亡率有無差異;采用流式細胞術(shù)檢測骨髓干細胞CD34自身抗體陽性IRP患者骨髓干細胞凋亡率，比較鐵過載組與非鐵過載組干細胞凋亡率有無差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.①鐵過載IRP患者BMMNC、粒系、紅系和干細胞ROS平均熒光強度(MFI)分別為109.11±34.81、120.49±36.32、51.77±19.62及64.64±25.87均明顯高于非鐵過載IRP患者（57.42±27.

4、33、70.28±31.77、31.87±13.67及39.46±17.96）和正常對照組（45.60±23.78、64.13±29.61、23.21±11.72及41.76±20.39）(P＜0.05);而非鐵過載IRP患者與正常對照組BMMNC、粒系、紅系和干細胞ROS(MFI)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 ②鐵過載IRP患者BMMNC、紅系和干細胞Bel-2的MFI分別為32.33±16.49、81.17±

5、25.39及73.19±15.88均明顯低于非鐵過載IRP患者(65.53±20.62、130.43±33.66及95.99±23.02)和正常對照組（56.05±25.35、133.14±38.87及106.19±26.33)(P＜0.05);非鐵過載IRP患者粒系Bcl-2的MFI為23.75±8.65明顯低于正常對照組(38.53±13.75)(P＜0.05)，而非鐵過載IRP患者與正常對照組BMMNC、紅系和干細胞Bcl-2的M

6、FI比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 ③鐵過載IRP患者粒系、紅系和干細胞Caspase-3的MFI分別為27.97±9.70、8.00±2.92及9.61±2.49均明顯高于非鐵過載IRP患者(19.71±5.49、5.17±1.83及6.56±1.65)及正常對照組（15.85±6.32、4.00±1.39及5.48±1.31）(P＜0.05);而非鐵過載IRP患者與正常對照組比較，粒系、紅系和干細胞Caspas

7、e-3的MFI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 ④鐵過載IRP患者BMMNC、粒系、紅系和干細胞凋亡率分別為(49.52±14.40)％、(49.88±16.86)％、(84.55±7.92)％及(55.37±13.49)％均明顯高于非鐵過載IRP患者[（29.78±12.96）％、(23.79±10.42)％、(75.01±10.69)％及(43.49±10.79)％]和正常對照組[（24.09±8.05）％、(22.

8、29±7.37)％、(53.29±10.27)％及(38.94±13.62)％](P＜0.05);非鐵過載IRP患者紅系凋亡率（75.01±10.69）％高于正常對照組[（53.29±10.27）％](P＜0.05)，而非鐵過載IRP患者與正常對照組BMMNC、粒系和干細胞凋亡率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.①鐵過載IRP患者經(jīng)NAC處理后BMMNC、粒系、紅系和干細胞ROS的MFI分別為52.96±28.2

9、9、66.73±30.52、30.29±14.89及37.21±20.39，均明顯低于NAC處理前（103.91±33.98、118.17±41.85、55.42±16.92及72.01±30.97）(P＜0.05)。
　　 ②鐵過載IRP患者經(jīng)NAC處理后BMMNC、粒系和紅系細胞內(nèi)Bcl-2的MFI分別為64.57±16.18、42.87±13.10及106.89±24.36，均明顯高于NAC處理前（38.06±17.58、

10、20.35±9.67及78.47±25.92）(P＜0.05)，NAC處理后干細胞Bcl-2的MFI為82.62±20.68高于NAC處理前（73.99±18.51）(P＞0.05)。
　　 ③鐵過載IRP患者經(jīng)NAC處理后的粒系、紅系細胞內(nèi)Caspase-3的MFI分別為16.81±4.25及5.21±1.89，均明顯低于NAC處理前（25.52±5.88及6.83±1.75）(P＜0.05)，NAC處理后干細胞內(nèi)Caspas

11、e-3的MFI為7.75±2.74低于NAC處理前（8.49±2.28）(P＞0.05)。
　　 ④鐵過載IRP患者經(jīng)NAC處理后BMMNC、紅系和干細胞凋亡率分別為（37.94±14.22）％、（47.58±10.91）％及（31.99±14.19）％，均明顯低于NAC處理前[（49.87±13.50）％、（84.59±9.12）％及（52.81±14.49）％](P＜0.05);NAC處理后粒系凋亡率為（42.85±24.4

12、0）％低于NAC處理前[（48.37±21.11）％](P＞0.05)。
　　 3.①鐵過載IRP患者外周血CD4+T淋巴細胞百分率為（40.86±8.74）％，明顯高于非鐵過載IRP患者[（35.96±7.03）％]和正常對照組[（28.00±6.73）％]，非鐵過載IRP患者明顯高于正常對照組(P＜0.05)。
　　 ②鐵過載IRP患者外周血CD8+T淋巴細胞百分率為（29.14±6.77）％，明顯低于非鐵過載IRP

13、患者[（33.42±7.49）％]和正常對照組[（35.40±5.27）％](P＜0.05)，非鐵過載IRP患者低于正常對照組(P＞0.05)。
　　 ③鐵過載IRP患者CD4+T/CD8+T淋巴細胞為（144.00±36.23）％，明顯高于非鐵過載IRP患者[（113.85±37.31）％]和正常對照組[（79.50±21.27）％]，非鐵過載IRP患者明顯高于正常對照組(P＜0.05)。
　　 ④鐵過載IRP患者CD

14、8+T淋巴細胞凋亡率為（27.35±10.76）％，明顯高于非鐵過載IRP患者[（15.47±8.99）％](P＜0.05)。
　　 ⑤鐵過載IRP患者CD4+T淋巴細胞凋亡率為(12.10±5.57)％高于非鐵過載IRP患者[(10.49±4.14)％](P＞0.05)。
　　 ⑥鐵過載IRP患者CD8+T淋巴細胞凋亡率/CD4+T淋巴細胞凋亡率為(251.50±80.60)％，明顯高于非鐵過載IRP患者[（139.3

15、0±47.10）％](P＜0.05)。
　　 4.①在24例骨髓有核紅細胞膜抗體陽性IRP患者中，鐵過載組骨髓紅系凋亡率為（87.76±6.61）％，明顯高于非鐵過載組[（66.11±18.78）％](P＜0.05);
　　 ②在27例骨髓干細胞膜抗體陽性IRP患者中，鐵過載組骨髓干細胞凋亡率為（56.03±14.20）％，明顯高于非鐵過載組[（43.29±10.56）％](P＜0.05)。
　　 結(jié)論: