Smad7反義寡核苷酸在潰瘍性結腸炎中的防治作用及其機制的研究.pdf

1、目的：探討Smad7反義寡核苷酸在防治潰瘍性結腸炎中的作用及其發(fā)生機制。 方法： 1.動物模型的建立：將小鼠分為三組，分別為實驗組、治療組和對照組。實驗組給予惡唑酮灌腸制作潰瘍性結腸炎模型；治療組聯(lián)合應用惡唑酮和Smad7反義寡核苷酸灌腸；對照組則正常喂養(yǎng)，不采取任何措施。動物實驗結束后處死全部小鼠，取結腸段用10％中性多聚甲醛固定，石蠟包埋，待檢；同時留取部分結腸組織-80℃保存。 2.實驗研究：(1) 蘇木精

2、-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察小鼠結腸組織病理形態(tài)學變化；(2) 免疫組織化學方法檢測用藥后Smad7、Smad4、TGF.βR I和TGF-βR II蛋白在結腸細胞中的表達；(3) Western blot法檢測Smad7、SmM4、TGF-βR I和TGF-βRII在結腸細胞中的表達水平。 結果： 1.末小鼠一般情況：實驗組和治療組小鼠均于灌腸24h后出現(xiàn)厭食、懶動和稀便；以后，實驗組小鼠相繼出現(xiàn)便血或者大便隱血陽性

3、(聯(lián)苯胺法)，治療組小鼠則無便血，偶有大便隱血陽性；兩組小鼠均有體重下降，但實驗組小鼠體重下降更明顯，與治療組相比差異顯著(p<0.05)；對照組小鼠則無任何異常反應，體重增加。 2.小鼠結腸粘膜大體形態(tài)觀察：對照組小鼠結腸黏膜無水腫、糜爛及潰瘍形成，偶見遠端黏膜輕度充血，平均評分值為0.167±0.408；實驗組小鼠遠端結腸黏膜明顯充血水腫，可見較多小潰瘍，病變連續(xù)存在，平均評分值為3.667±0816，與對照組比較差異顯著(

4、p<0.05)；治療組小鼠遠端結腸黏膜亦有充血水腫，程度較輕，潰瘍較少且面積較小，平均評分值為1.000±1.095，與實驗組相比評分下降，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 3.免疫組織化學方法染色結果顯示，小鼠結腸粘膜組織中實驗組Smad7的陽性表達增加，陽性率為81.0±4.64％，與對照組(15.7±5.68％)相比差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，治療組的陽性表達(37.7±4.52％)與實驗組相比明顯減少(p<0.0

5、5)；而Smad4、TGF-βRⅡ的陽性表達在實驗組減少，陽性率分別為32.7±4.37％、30.4±4.01％，與對照組比較差異同樣有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，在治療組中兩者的表達增加，分別為42.8±4.95％、47.1±4.10％，與實驗組比較差異顯著(p<0.05)。 4.Western blot檢測：在實驗組小鼠結腸組織中Smad7的表達量為4.96±0.67，顯著高于對照組(2.68±1.28)，兩組比較差異有統(tǒng)計

6、學意義(p<0.05)，而治療組的表達量為2.77±0.96，顯著低于實驗組(p<0.05)；Smad4在實驗組的表達量為0.96±0.14，顯著低于對照組(1.18±0.17)，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，在治療組中表達量為1.39±0.19，顯著高于實驗組(p<0.05)；TGF-βRⅡ在實驗組的表達量為0.65±0.15，顯著低于對照組(0.95±0.06)，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，在治療組中TGF-βRⅡ的表達增

7、加(1.10±0.14)，與實驗組比較顯著上調(p<0.05)；TGF-βRⅠ在對照組中的表達量為0.73±0.38，實驗組和治療組中的表達量分別為1.17±0.25，和0.80±0.13，三組相比差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 結論： 1.應用惡唑酮成功制作了小鼠UC模型。 2.Smad7反義寡核苷酸能有效防治惡唑酮誘發(fā)的UC，為其進一步用于UC的防治提供了理論依據(jù)。 3.UC小鼠結腸組織中存在T