體外聯(lián)合應(yīng)用IL-10和甲基強(qiáng)的松龍?zhí)幚順渫粻罴?xì)胞誘導(dǎo)移植免疫耐受的研究.pdf

1、目的：探討體外聯(lián)合應(yīng)用白細(xì)胞介素10(IL-10)和甲基強(qiáng)的松龍(Medron)處理供體樹突狀細(xì)胞(DC)對(duì)小鼠皮膚移植術(shù)后免疫耐受的誘導(dǎo)效果，為尋找有效、經(jīng)濟(jì)的免疫耐受方案和抗移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)治療提供依據(jù)。 材料和方法：以健康成年C57BL/6小鼠為供體，采用密度梯度離心法獲得脾臟來源單核細(xì)胞，在含rmGM-CSF和rmIL-4的RMPI 1640完全培養(yǎng)液中常規(guī)培養(yǎng)6天即為未成熟DC，而后根據(jù)處理因素的不同將細(xì)胞分為四組

2、： 1、未經(jīng)處理的對(duì)照組； 2、不同濃度的rmIL-10處理組； 3、不同濃度的Medron處理組； 4、rm-IL-10+Medron處理組。 各組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至第8天后收獲。BALB/c小鼠為受體，隨機(jī)分為11組。除A組外，其余各組均于皮膚移植前3天自尾靜脈輸入對(duì)應(yīng)的供體DC(1x107/只)。具體對(duì)應(yīng)關(guān)系如下：A組為空白對(duì)照，尾靜脈輸入生理鹽水；B組為輸入未修飾的DC；C1組為10μg/L

3、rmIL-10處理組；C2組為30μg/LrmIL-10處理組；D1組為10mg/L Medron處理組；D2組為20mg/LMedron處理組；E1~E4組分別為10μg/LrmIL-10+10mg/L Medron處理組、lOμg/LrmIL-10+20mg/L Medron處理組、30μg/LrmIL-10+10mg/Lmedron處理組、30μg/L rmIL-10+20mg/L Medron處理組。同時(shí)設(shè)立F組，為BALB/c

4、對(duì)BALB/c的同種同基因皮片移植。各組行皮膚移植術(shù)，觀察受體移植皮片存活情況。以各組DC為刺激細(xì)胞，BALB/c小鼠脾臟T細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，體外單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測(cè)細(xì)胞免疫排斥反應(yīng)的變化。 結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組中，生理鹽水組的移植皮片存活時(shí)間最短，移植后6~9天被完全排斥。rmIL-10處理組中高劑量組(30μg/L)的移植皮片存活時(shí)間為19.3±2.1天，低劑量組(10μg/L)為16.O±2.0天，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(P<0.05)，高劑量rmIL-10誘導(dǎo)免疫耐受的效果更好；與此相反，Medron處理組中高劑量組(20mg/L)移植皮片存活時(shí)間為11.3±2.1天，低劑量組(10mg/L)為13.3±1.55k，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，低劑量Medron誘導(dǎo)免疫耐受的效果更好。 rmIL-10+Medron處理組中，E3組(30μg/LrmIL-10+10mg/L Medron處理組)的移植皮片存活時(shí)間最長(zhǎng)，為23.0±3

6、.0天，E1組(10μg/L rmIL-10+10mg/LMedron處理組)為18.7±1.55k，E2組(10μg/L rmIL-10+20mg/L Medron處理組)為11.7±1.55天，EA組(30μg/L rmIL-10+20mg/L Medron處理組)為13.O±2.0天。經(jīng)完全隨機(jī)分組兩因素析因設(shè)計(jì)與方差分析，rmIL-10和Medron在預(yù)處理供體DC誘導(dǎo)移植免疫耐受具有交互作用(P<0.05)，且E3組誘導(dǎo)免疫耐

7、受的效果最好。單向MLR試驗(yàn)中，經(jīng)30μg/L rmIL-10+10mg/L Medron處理后的DC刺激反應(yīng)細(xì)胞增殖的刺激指數(shù)(SI)最低，這與前面皮片存活時(shí)間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的。 結(jié)論：IL-10單藥治療在高劑量時(shí)有較好的免疫耐受誘導(dǎo)作用，而Medron在低劑量時(shí)的誘導(dǎo)作用較好。聯(lián)合應(yīng)用高劑量IL-10和低劑量Medron修飾供體樹突狀細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行預(yù)處理，可明顯延長(zhǎng)移植皮片的存活時(shí)間，與其他實(shí)驗(yàn)處理組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P