神經營養(yǎng)素3基因真核表達載體的構建及在面神經損傷治療的初步研究.pdf

1、安徽醫(yī)科大學碩士學位論文神經營養(yǎng)素3基因真核表達載體的構建及在面神經損傷治療的初步研究姓名：陳傳好申請學位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學指導教師：韓卉趙莉20040401安徽醫(yī)科大學碩士學位論文神經營養(yǎng)素3基因真核表達載體的構建及在面神經損傷治療的初步研究研究生：陳傳好導師：韓卉教授趙莉教授安徽醫(yī)科大學人體解剖學教研室合肥230032中文摘要目的：重組神經營養(yǎng)素3基因，在面神經損傷模型作肌肉真核表達，為治療神經損傷打下科研基礎。方

2、法：利用蛋白酶K裂解法從外周血中獲取健康人基因組DNA，采用PCR方法從中擴增出編碼神經營養(yǎng)素3全長基因，然后與線形克隆載體pMDl8T連接，并將其亞克隆至真核表達載體pcDNA31()：大量制備并純化重組質粒pcDNA31()NT。3；離斷大鼠兩側面神經的下頜緣支和頰支的主干，制備面神經損傷模型。用微量注射器將DCChol和pcDNA31()NT3混合物直接注射到大鼠的右側(實驗側)面神經切斷處神經所支配的肌肉內，左側(對照側)只注射

3、DCChol和pcDNA31()混合物。在轉基因后，觀察大鼠觸須拂動恢復情況。第7天，采用RT—PCR技術檢測轉基因處肌肉的NT。3基因表達。結果：PCR擴增出一約780bp的DNA片段；將重組質粒pMDl8一NT一3、DcDNA31()Nq‘3分別作Hf州III和肋DRI雙酶切，都能得到一個大小與PCR擴增產物一致的插入片段：測序結果表明：NT一3基因與Genbank中基因序列高度符合，同時表示M一3基因的克隆和亞克隆均成功；經脂質體