晚期糖基化終產(chǎn)物對急性冠脈綜合征血小板活性的影響及其機(jī)制.pdf

1、冠狀動脈粥樣硬化斑塊形成是導(dǎo)致冠心病的基礎(chǔ)，而粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定和急性血栓形成則是導(dǎo)致急性冠狀動脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。糖尿病是冠心病的獨(dú)立危險因素。本研究結(jié)果表明糖尿病合并急性冠脈綜合征患者的血糖水平較糖尿病合并穩(wěn)定型心絞痛患者顯著提高;在眾多冠心病危險因素如年齡、血壓、血脂等中，血糖相關(guān)指標(biāo)異常與心肌酶譜異常升高關(guān)系最為密切;上述研究結(jié)果均提示了糖尿病合并冠心病患者罹患急性冠脈

2、綜合征的可能性較非糖尿病合并冠心病患者顯著提高。血糖指標(biāo)的提高與不穩(wěn)定型心絞痛或非ST段抬高型心梗的關(guān)系較穩(wěn)定型心絞痛與ST段抬高型心梗更為密切;更進(jìn)一步地，冠脈造影下有血栓影患者的空腹血糖水平較冠脈造影下無血栓影患者顯著性提高，結(jié)合上述研究結(jié)果我們推測高血糖可提高血小板活性并促進(jìn)急性血栓形成。晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)在糖尿病血管并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用，AGEs與

3、其特異性受體RAGE（receptorsfor advanced glycation end products）相互作用調(diào)節(jié)下游的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)。我們通過Western blot已證實(shí)血小板細(xì)胞膜上表達(dá)有RAGE，AGEs呈濃度依賴性地提高血小板的活性;血小板表面RAGE的表達(dá)亦隨AGEs濃度提高呈現(xiàn)先遞增后遞減的趨勢，然而未提示統(tǒng)計學(xué)意義，上述結(jié)果提示AGEs可提高血小板的活性。繼而我們通過Western blot發(fā)現(xiàn)AGEs呈濃度依賴

4、性地提高PKCα的表達(dá)水平及磷酸化水平;而PKCβ1和PKCβ2的表達(dá)水平和磷酸化水平雖呈現(xiàn)一定程度的變化趨勢，然而未提示統(tǒng)計學(xué)意義，因此我們推測AGEs可能通過調(diào)節(jié)PKCα的表達(dá)和磷酸化參與血小板的活化過程。此外，AGEs可呈濃度依賴性地提高血小板JNK的表達(dá)水平以及磷酸化水平，同時呈濃度依賴性地激活Caspase3的剪切，因此AGEs可能通過JNK-Caspase3這一凋亡相關(guān)信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)血小板的激活過程。進(jìn)一步地我們發(fā)現(xiàn)PKC

5、α抑制劑可顯著逆轉(zhuǎn)AGEs對血小板的活化作用，然而對血小板膜表面RAGE表達(dá)水平則無顯著影響;同時PKCα抑制劑可顯著抑制AGEs對血小板JNK磷酸化的促進(jìn)作用，并對抗AGEs對Caspase3的剪切激活，因此PKCα作為AGEs-RAGE的下游信號分子可能通過調(diào)節(jié)其下游JNK的磷酸化繼而Caspase3的剪切激活而參與血小板活性的調(diào)節(jié)。綜上，AGEs可能通過RAGE-PKCα-JNK-Caspase3信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)血小板的活性水平，

6、該結(jié)果從分子層面解釋了糖尿病促進(jìn)急性冠脈綜合征急性血栓形成這一臨床現(xiàn)象。
　　第一部分糖尿病促進(jìn)急性冠脈綜合征的發(fā)生發(fā)展
　　目的:探討糖尿病是否對急性冠脈綜合征急性血栓形成起促進(jìn)作用。
　　方法:我們選擇了穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、非ST段抬高型心梗和ST段抬高型心?；颊吖?42例，收集其臨床數(shù)據(jù)，分析臨床背景資料;通過回顧性分析探討急性冠脈綜合征與糖尿病的因果關(guān)系;通過ANOVA檢驗(yàn)分析空腹血糖、餐后2小時血糖

7、、隨機(jī)血糖和糖化血紅蛋白等血糖相關(guān)指標(biāo)與冠心病各類型之間的關(guān)系;通過相關(guān)性分析研究上述血糖相關(guān)指標(biāo)與心肌酶譜及心功能指標(biāo)之間的相關(guān)性;通過多元回歸分析探討在眾多冠心病危險因素中血糖異常對急性冠脈綜合征的影響程度;以O(shè)RIGIN空腹血糖目標(biāo)（4-5.3mmol/L）為指導(dǎo)通過回顧性分析探討在接受降糖治療的前提下急性冠脈綜合征與空腹血糖的關(guān)系。
　　結(jié)果:卡方檢驗(yàn)結(jié)果提示不穩(wěn)定型心絞痛組、非ST段抬高型心肌梗死組和ST段抬高型心肌梗死

8、組與對照組間非糖尿病和糖尿病患者構(gòu)成比均無顯著差異(P＞0.05)。ANOVA分析結(jié)果表明非ST段抬高型心梗組的空腹血糖水平顯著高于穩(wěn)定型心絞痛組和不穩(wěn)定型心絞痛組(P＜0.05)，而與ST段抬高型心梗組無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。卡方檢驗(yàn)結(jié)果提示，非糖尿病和糖尿病患者構(gòu)成比在冠脈造影下無血栓影和有血栓影兩組之間無顯著性差異(P＞0.05);而空腹血糖在無血栓影組和有血栓影組之間則存在顯著性差異(P＜0.05)。Kendall相關(guān)性分

9、析和Spearman相關(guān)性分析提示空腹血糖與CK-MB、cTnT、LDH、BNP在0.01水平上顯著相關(guān)，與CK、LA在0.05水平上顯著相關(guān)。多元回歸分析提示血糖水平，尤其是空腹血糖水平對心肌酶譜的影響較其余冠心病危險因素更為顯著。以O(shè)RIGIN空腹血糖目標(biāo)(4-5.3mmol/L)為指導(dǎo)的回顧性分析提示在接受降糖治療前提下急性冠脈綜合征患者的空腹血糖水平顯著高于穩(wěn)定型心絞痛患者(P＜0.05)。
　　結(jié)論:高血糖對急性冠脈綜合

10、征發(fā)生發(fā)展和急性血栓形成起著促進(jìn)作用。
　　第二部分晚期糖基化終末產(chǎn)物提高急性冠脈綜合征合并糖尿病患者血小板的活性及其信號傳導(dǎo)機(jī)制
　　目的:研究AGEs對血小板活性的影響及其信號傳導(dǎo)機(jī)制。
　　方法:抽取急性冠脈綜合征合并糖尿病患者靜脈空腹全血樣本，制備富血小板血漿(PRP)并分為如下各組:對照組，AGEs低濃度組（20ug/ml），AGEs中濃度組(100ug/ml)，AGEs高濃度組（500ug/ml）;檢測各組

11、血小板聚集率，通過Western blot檢測各組血小板RAGE表達(dá)水平、PKCα、PKCβ1、PKCβ2和JNK的表達(dá)和磷酸化水平和Caspase3剪切活性。單獨(dú)應(yīng)用PKCα抑制劑Ro-32-0432或同時應(yīng)用Ro-32-0432+AGEs干預(yù)血小板，檢測血小板聚集率，通過Westernblot檢測RAGE表達(dá)水平、PKCα和JNK的表達(dá)和磷酸化水平和Caspase3剪切活性。單獨(dú)應(yīng)用PKCβ2抑制劑CGP53353或同時應(yīng)用CGP5

12、3353+AGEs干預(yù)血小板，檢測血小板聚集率，通過Western blot檢測RAGE表達(dá)水平、PKCβ2和JNK的表達(dá)和磷酸化水平和Caspase3剪切活性。
　　結(jié)果:AGEs呈濃度依賴性地提高血小板的活性;血小板表面RAGE的表達(dá)隨AGEs濃度提高呈現(xiàn)先遞增后遞減趨勢(P＞0.05); AGEs呈濃度依賴性地提高PKCα表達(dá)和磷酸化水平(P＜0.05)，而對PKCβ1和PKCβ2則無顯著影響(P＞0.05); AGEs呈濃

13、度依賴性地促進(jìn)JNK表達(dá)及磷酸化和Caspase3的剪切激活(P＜0.05)。PKCα抑制劑Ro-32-0432可顯著逆轉(zhuǎn)AGEs對血小板的活化作用;對血小板RAGE表達(dá)無明顯影響(P＞0.05); Ro-32-0432可顯著抑制AGEs對血小板JNK磷酸化的促進(jìn)作用，并對抗AGEs對Caspase3的剪切激活(P＜0.05)。PKCβ2抑制劑CGP53353對血小板活性、RAGE的表達(dá)、JNK和Caspase3的激活無顯著性影響(P＞

14、0.05)。
　　結(jié)論:AGEs可能通過RAGE-PKCα-JNK-Caspase3信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)血小板的活性水平。
　　結(jié)論：
　　1、高血糖對急性冠脈綜合征發(fā)生發(fā)展和急性血栓形成起著促進(jìn)作用。
　　2、AGEs可能通過RAGE-PKCα-JNK-Caspase3信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)血小板的活性水平。
　　創(chuàng)新點(diǎn)和研究意義：
　　1、本研究提出血小板活性水平提高是糖尿病促進(jìn)急性冠脈綜合征發(fā)生發(fā)展的重要