枯草芽孢桿菌對(duì)桑椹采后致腐真菌的抑制及機(jī)理研.pdf

1、桑椹為桑(Morus alba L)多年生木本植物桑樹(shù)的果實(shí)，為聚花果，味酸甜。桑椹中含有多種功能性活性物質(zhì)，如白黎蘆醇、花青素、蘆丁等等，具有良好的抗癌、抗氧化性、抗?jié)?、抗病毒等作用。然而，桑椹屬于漿果類(lèi)水果，含水量高，果皮極薄，柔軟多汁，成熟期正值高溫季節(jié)，室溫下存放1-2d即開(kāi)始腐爛變質(zhì)。目前，國(guó)內(nèi)外水果保鮮多采用化學(xué)保鮮和物理保鮮，但隨著人們對(duì)健康、安全、環(huán)保的重視，生物保鮮將是一個(gè)極具有發(fā)展前景的方法。為研究桑椹生物保鮮的有

2、效方法，本論文研究了抑制桑椹主要致腐真菌生長(zhǎng)的拮抗微生物，探討了枯草芽孢桿菌的抑菌物質(zhì)及其作用機(jī)理，以期為桑椹微生物保鮮提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。取得如下研究結(jié)果：
　　1、拮抗微生物的篩選。分別以畢赤酵母、鎖擲酵母、枯草芽孢桿菌、哈茨木霉4種微生物為試驗(yàn)對(duì)象，采用平板對(duì)峙培養(yǎng)法，測(cè)定對(duì)桑椹致腐真菌生長(zhǎng)的抑制率。結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌對(duì)桑椹致腐真菌生長(zhǎng)的抑制效果最佳。采用生長(zhǎng)速率法，分別以枯草芽孢桿菌菌懸液、發(fā)酵液上清、發(fā)酵濾液對(duì)桑

3、椹致腐真菌的抑菌效果，研究枯草芽孢桿菌的抑菌物質(zhì)。結(jié)果顯示，枯草芽孢桿菌菌懸液的抑菌效果最好，對(duì)鏈格孢屬霉菌(Alternariasp. GE)和核盤(pán)菌屬霉菌(Sclerotinia sclerotiorum.GA)致腐菌分別達(dá)到77.88％和80.61%，并且共培養(yǎng)8 d后依然有很好的抑制效果，說(shuō)明枯草芽孢桿菌的抑菌物質(zhì)主要存在于細(xì)胞中，其中菌懸液中含量最高。
　　2、枯草芽孢桿菌抑菌物質(zhì)的分離純化及性質(zhì)研究。離心分離枯草芽孢桿

4、菌的發(fā)酵液，采用酸沉醇提法提取抑菌物質(zhì)，經(jīng) SephadexG-100分離純化，獲得p1、p2、p3三個(gè)組分。抑菌實(shí)驗(yàn)顯示組分p2有較好的抑菌作用，結(jié)合紫外光譜、紅外光譜，以及MALDI-TOF-MS/MS分析，該抑菌物質(zhì)含有肽鏈和脂肪酸鏈，為脂肽類(lèi)的泛革素類(lèi)物質(zhì)，主要是分子量為1477.57的Fengycin A和分子量1491.58的Fengycin B；極性較大，適合大極性的有機(jī)溶劑提?。痪哂休^好的熱穩(wěn)定性，在偏酸性、中性環(huán)境中抑

5、菌效果穩(wěn)定，對(duì)蛋白酶K不敏感。
　　3、枯草芽孢桿菌泛革素類(lèi)物質(zhì)的抑菌機(jī)制初探。實(shí)驗(yàn)證實(shí)枯草芽孢桿菌泛革素類(lèi)物質(zhì)對(duì)桑椹致腐菌鏈格孢屬霉菌(Alternariasp. GE)和核盤(pán)菌屬霉菌(Sclerotinia sclerotiorum.GA)有較好的生長(zhǎng)抑制作用。顯微觀察顯示，經(jīng)抑菌物質(zhì)處理后的致腐菌菌絲出現(xiàn)斷裂，枯草芽胞桿菌通過(guò)分泌抑菌物質(zhì)來(lái)抑制致腐菌的生長(zhǎng)，表現(xiàn)為營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)。經(jīng)枯草芽孢桿菌菌懸液處理后的桑椹POD酶活性顯著升高