樺褐孔菌多糖結構及生物活性研究.pdf

1、樺褐孔菌Inonotus obliquus(Pers.:Fr.) Pilat屬擔子菌亞門、層菌綱、非褐菌目、多孔菌科、褐臥孔菌屬，在我國主要分布于黑龍江和吉林省的長白山地區(qū)。據(jù)文獻報道樺褐孔菌多糖具有抗腫瘤、免疫調節(jié)、抗氧化和降血糖等生理功能。但目前的研究主要集中在粗多糖的藥理活性上，對樺褐孔菌多糖的分離純化和結構研究報道較少。為進一步探討樺褐孔菌多糖活性與結構之間的關系，本文對樺褐孔菌多糖的提取、分離純化、理化性質、結構和生物活性等方

2、面進行了較為系統(tǒng)的研究，得到如下結論:
　　1.樺褐孔菌子實體多糖的提取工藝研究
　　通過單因素分析和正交試驗，確定了水溶多糖與堿溶多糖的最佳提取工藝。水溶多糖的適宜提取條件為料液比1:20(w:v)、提取溫度90℃、提取時間lh，多糖得率為0.992％。提取液濃縮后醇沉的條件為提取液濃縮4倍，加3倍乙醇醇析時，多糖最大沉淀率為97.9％。
　　堿溶多糖的適宜提取條件為料液比為1:20(w:v)，NaOH濃度為0.5m

3、ol/L，提取時間為1h，乙醇濃度為85％，在此條件下樺褐孔菌堿溶性多糖的得率為0.659％。
　　2.樺褐孔菌子實體多糖的分離純化研究
　　應用熱水煮提和乙醇沉淀的方法，獲得了樺褐孔菌多糖IOP，收率為2.67％。IOP的總糖含量為37.2％，蛋白含量為17.8％。經(jīng)氣相色譜分析，IOP中含有鼠李糖(7.59％)、葡萄糖(50.87％)、木糖(10.63％)、半乳糖(14.96％)和甘露糖(15.95％);
　　應用

4、稀堿溶液煮提和乙醇沉淀的方法，獲得了樺褐孔菌堿溶多糖AIOP，收率為2.14％。AIOP的總糖含量為31.4％，蛋白含量為16.3％。經(jīng)GC分析得知，AIOP含有鼠李糖(8.90％)、甘露糖(5.21％)、半乳糖(13.58％)、葡萄糖(62.54％)、木糖(6.71％)和葡萄糖醛酸(3.06％);
　　建立了DEAE-纖維素和分子篩層析相結合的分級方法，對去蛋白和脫色后的樺褐孔菌多糖進行比較系統(tǒng)的分級，獲得了七種多糖級分，其中:

5、兩種中性糖級分IOPN-I和IOPN-II;三種酸性糖級分IOPS-I-A、IOPS-I-B和IOPS-II-A;兩種堿溶多糖AIOP-I和AIOP-II，其分子量分布均一，大小在3.3x103到5.9×103之間。
　　3.樺褐孔菌子實體多糖的結構研究
　　采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和二維核磁共振等方法，對樺褐孔菌多糖中收率和純度較高的級分IOPN-I進行了結構研究。結果表明IOPN-I主要由β構型

6、糖苷鍵構成，也有少量a構型糖苷鍵;其主鏈部分主要由(1→3)-β-D-Man、(1→3，6)-β-D-GIc、(1→6)-3-O-Me-β-D-Ga1、(1→3)-a-D-Glc和(1→6)-β-D-Glc構成;分支點糖殘基是(1→3，6)-β-D-GIc;(1→)-β-D-GIc形成主鏈的非還原末端;Glc構成支鏈或主鏈邊緣的末端殘基;主鏈核心區(qū)每8個己糖殘基有1個非還原末端或1個1→6糖苷鍵。
　　4.樺褐孔菌子實體多糖的生物

7、活性研究
　　通過多糖對小鼠免疫系統(tǒng)影響的實驗表明，樺褐孔菌多糖能促進B淋巴細胞的增殖;增強巨噬細胞的吞噬功能;提高巨噬細胞分泌TNF-α的能力;增加NO的生成量;提高了荷瘤小鼠的免疫功能。
　　體內抗腫瘤實驗表明，樺褐孔菌多糖在抑制S180腫瘤細胞生長的同時，增加了荷瘤小鼠的相對脾重、相對胸腺重以及小鼠血清中TNF-α的含量。但體外實驗證明多糖對S180、Hela、BGC-830及HepG2細胞并沒有直接的殺傷作用，說明樺