ATP synthaseα抑制Aβ神經(jīng)毒性損傷的機(jī)制研究.pdf

1、J口博士學(xué)位論文A T P s y n t h a s e 旺抑制A p 神經(jīng)毒性損傷的機(jī)制研究博士研究生： 孫小波專導(dǎo)苣業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)師：朱粹青副教授位： 復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)系醫(yī)學(xué)神經(jīng)生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室二O 一一年四月卜二_ ．k ■廠呈蘭查蘭塑主堡蘭! ! 型! 坐豎! 型型業(yè)塑絲墨絲塑垡些! ! 型墮鎏縮略語表中文摘要前言● 第一部分A T P 臺(tái)酶q 弧單位抑制A B 介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用口口材料與方法1 材料兇種與質(zhì)

2、粒2 主要藥品及試劑 ．．．3 引物臺(tái)成與D N A 序列測(cè)定4 主要儀器5 有關(guān)溶液的配制2 方法 1 62 I 質(zhì)粒構(gòu)建 1 62 ．2 堪受態(tài)太腸桿菌的轉(zhuǎn)化 1 92 ．3 挑斑，測(cè)序．．2 ．4 質(zhì)粒D N A 的抽提2 ．5 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 2 02 ．6 流式細(xì)胞儀分選 2 02 7S H ．S Y 5 Y 細(xì)胞的培養(yǎng) 2 02 ．8 細(xì)胞活力檢測(cè)．． 22 ．9 A 1 3 孵育人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 22 1 0 細(xì)胞免疫組化

3、?? 22 1 l 線托體膜電何的測(cè)定 2 22 1 2 H o e c h s t 船色 2 22 1 3 考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量 2 32 1 4 W e s t e r nB l o t 免艘印跡．． 2 32 I 5 統(tǒng)計(jì)分析 2 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ? ??? 2 53 l A 8 對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的毒性作用 ?? 2 53 ．2 纖維狀A(yù) B 引起的P a x i l l i n 和F a k 的應(yīng)激性反應(yīng) 2 53 ．3 纖維狀

4、A p 引起的c ．F O S 和A l P 合酶a 弧單位持續(xù)性增加 2 63 ．4 A T Ps y n 構(gòu)建和鑒定．． 2 73 ．5 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的形態(tài)學(xué)鑒定 2 83 , 6 A T P 臺(tái)酶n 亞單位與A P P 共定位 3 037 A T P 合酶a 旺單位和線粒體外膜特異性蛋白T O M 麩定位 3 13 ．8 A T P 臺(tái)酶Ⅱ弧單位利線粒體內(nèi)膜特異性蛋向T I M 批定位 3 23 ．9 A T P 臺(tái)酶q 難單位過表選