5-脂氧合酶在急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、研究背景：急性胰腺炎（AP）是一種常見的消化科急癥，其發(fā)病率和病死率較高，目前AP的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，近年研究顯示胰腺組織損傷過程中產(chǎn)生一系列炎性介質(zhì)，如氧自由基、前列腺素、白三烯（LTs）等，通過炎癥級聯(lián)瀑布放大作用，進(jìn)一步活化細(xì)胞因子，導(dǎo)致AP的發(fā)生和發(fā)展。LTs 是強(qiáng)效的炎性介質(zhì)，參與炎癥、變態(tài)反應(yīng)、休克等過程，在許多急慢性炎性疾病中起重要作用，因此阻斷LTs的合成或抑制其與受體的結(jié)合將會成為治療這些疾病的重要方法。5-脂氧合

2、酶（LOX）是將花生四烯酸、亞油酸及其他多不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂猩锘钚缘拇x產(chǎn)物的限速酶，從而影響細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、結(jié)構(gòu)及代謝。近年來的研究發(fā)現(xiàn)5-LOX 在急性胰腺炎的發(fā)生、發(fā)展中亦起到重要作用，因此有必要探討5-脂氧合酶在急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中所起的作用。 研究目的：研究5-LOX在實(shí)驗(yàn)性急性壞死性胰腺炎（ANP）胰腺組織中的表達(dá)情況；并且運(yùn)用5-LOX選擇性抑制劑齊留通干預(yù)，觀察齊留通對急性壞死性胰腺炎中性粒細(xì)胞活化的作用，以

3、及其對急性壞死性胰腺炎胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響和意義，以探討5-LOX在急性壞死性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用。 研究方法：清潔級健康雄性SD大鼠54只，隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組（簡稱SHAM組）、急性壞死性胰腺炎組（簡稱ANP組）、齊留通組，胰管內(nèi)逆行注入5％?；悄懰徕c建立大鼠ANP模型，假手術(shù)組以生理鹽水代替?；悄懰徕c，齊留通組在建立ANP模型前1小時，齊留通100mg/kg灌胃。 HE染色并于光鏡下觀察胰腺組織病理學(xué)變化；酶

4、動力化學(xué)法檢測各組大鼠血清淀粉酶的水平；免疫組化法和免疫印跡（Western blotting）檢測胰腺組織5-LOX蛋白的表達(dá)情況；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測各組大鼠胰腺組織5-LOXmRNA、凋亡相關(guān)基因Caspase-3、Bcl-2、BaxmRNA的表達(dá)水平變化；ELISA方法檢測血清LTB4、可溶性細(xì)胞間黏附分子-1、可溶性E-選擇素、可溶性P-選擇素的水平；免疫組化方法檢測各組大鼠胰腺組織ICAM-1、E–選擇素、

5、P-選擇素的表達(dá)情況；檢測各組大鼠胰腺組織中的髓過氧化物酶（MPO）活性；采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)換酶(TdT)介導(dǎo)的原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測胰腺組織腺泡細(xì)胞凋亡的變化。 研究結(jié)果： （1）同假手術(shù)組相比，ANP組大鼠胰腺組織光鏡下有明顯出血、腺泡細(xì)胞壞死和炎癥浸潤；血清淀粉酶、LTB4水平升高；胰腺組織5-LOX mRNA及5-LOX蛋白表達(dá)增加；血清sICAM-1、sE-selectin、sP-selectin水

6、平增加；胰腺組織ICAM-1、E-selectin、P-selectin表達(dá)增加；胰腺組織MPO活性明顯升高；胰腺組織Caspase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)增加；Bcl-2/BaxmRNA比值顯著降低，除外24小時，其它時點(diǎn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義；腺泡細(xì)胞凋亡均增多，凋亡指數(shù)明顯升高。 （2）與ANP組同時間點(diǎn)相比較，齊留通組胰腺炎癥細(xì)胞浸潤、壞死細(xì)胞明顯減少，病變減輕，病理學(xué)評分明顯降低，6小時的差

7、異無統(tǒng)計學(xué)意義，12小時、24小時的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；胰腺組織5-LOX mRNA及5-LOX蛋白表達(dá)顯著減少；血清淀粉酶、LTB4水平減少；血清sICAM-1、sE-selectin、sP-selectin水平減少；胰腺組織MPO活性明顯降低；胰腺組織ICAM-1、E-selectin、P-selectin表達(dá)減少；胰腺組織Caspase-3 mRNA、Bax mRNA表達(dá)增加，Bcl-2 mRNA表達(dá)減少；胰腺組織Bcl-2/Ba