慢性腎炎治療藥物組合庫(kù)的設(shè)計(jì)與合成.pdf

1、慢性腎炎是一類嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，常導(dǎo)致腎功能衰竭而危及患者的生命。慢性腎炎的發(fā)生與免疫功能紊亂有關(guān)，屬于自身免疫性疾病。對(duì)其治療尚無(wú)特效藥物，目前臨床上常采用激素類藥物和免疫抑制藥物來(lái)治療，而激素類藥物和免疫抑制劑的長(zhǎng)期使用有很大的副作用，因此尋找慢性腎炎新的治療藥物具有重要意義?，F(xiàn)代免疫學(xué)研究揭示，自身免疫性疾病的發(fā)生并不都是由于患者的免疫力過(guò)強(qiáng)，通常是由免疫紊亂引起，常常伴隨有免疫缺陷的發(fā)生。如能將失衡的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)到正常，才

2、是對(duì)自身免疫病的標(biāo)本兼治的方法。應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑治療自身免疫性疾病正成為研究熱點(diǎn)，文獻(xiàn)報(bào)道linomide是一個(gè)有效的免疫調(diào)節(jié)劑，在動(dòng)物疾病模型上對(duì)慢性腎炎等多種自身免疫疾病都有療效，linomide的衍生物FR137316在小鼠慢性移植物抗宿主病(chronic-graft-versus-hostdisease，GVHD)和自身免疫M(jìn)RL/1小鼠兩種腎炎模型均有較好的治療效果，和目前臨床上常用的治療慢性腎炎的激素藥物有類似的效果，F(xiàn)R1

3、37316是目前文獻(xiàn)報(bào)道的治療慢性腎炎最好的化合物。我們選擇Linomide和FR137316作為研究課題的先導(dǎo)物和陽(yáng)性對(duì)照藥，設(shè)計(jì)并合成了具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的4-羥基-喹啉-3-酰胺類化合物庫(kù)，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了初步的生物活性篩選和構(gòu)效關(guān)系討論，以尋找高效低毒的慢性腎炎治療藥物。 主要的研究工作和結(jié)果如下：1.通過(guò)大量的文獻(xiàn)調(diào)研，選定免疫調(diào)節(jié)劑linomide作為本課題的先導(dǎo)化合物，根據(jù)已報(bào)道的linomide衍生物的構(gòu)效關(guān)系(

4、SAR)研究結(jié)果以及目標(biāo)化合物的類藥性質(zhì)，包括了溶解性、穩(wěn)定性、毒性和滿足5倍律(ruleoffive)等方面的要求，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的免疫調(diào)節(jié)劑來(lái)氟米特(Leflunomide)和氯喹的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，設(shè)計(jì)了4-羥基-喹啉-3-酰胺類化合物庫(kù)，和先導(dǎo)化合物linomide最大的區(qū)別在于喹啉環(huán)2位沒(méi)有氧代，這就突破linomide的專利保護(hù)范圍，使我們?cè)O(shè)計(jì)的目標(biāo)化合物具有自主的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。 2.對(duì)庫(kù)化合物的合成路線進(jìn)行了探索，找到了一條簡(jiǎn)便

5、的合成路線，可以方便的在喹啉環(huán)和酰胺N上引入不同的取代基。庫(kù)化合物合成所需的兩種構(gòu)建單元為4-羥基-喹啉-3-羧酸乙酯類化合物和取代胺，所需的取代胺絕大部分可作為商品購(gòu)買(mǎi)，4-羥基-喹啉-3-羧酸乙酯類化合物可通過(guò)兩步反應(yīng)方便制備。實(shí)踐證明該方法的反應(yīng)條件易于控制，產(chǎn)物的分離純化也較簡(jiǎn)便，可用于同步合成，合成效率高。應(yīng)用該方法共合成4-羥基-喹啉-3-酰胺類化合物126個(gè)，均為新化合物，結(jié)構(gòu)未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，已申請(qǐng)了發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)?005

6、10063145.7)。 3.應(yīng)用1HNMR對(duì)全部的庫(kù)化合物進(jìn)行了分析，應(yīng)用MS和元素分析法對(duì)部分庫(kù)化合物進(jìn)行了分析，確證了庫(kù)化合物的結(jié)構(gòu)；應(yīng)用HPLC法隨機(jī)抽樣分析了13個(gè)化合物的純度，結(jié)構(gòu)表明合成的化合物的純度都在85％以上。 4.合成了兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照藥linomide和FR137316三克，并經(jīng)1HNMR、MS和元素分析法確證了結(jié)構(gòu)，對(duì)linomide用HPLC法進(jìn)行了純度分析，linomide的純度在99％以上。

7、 5.應(yīng)用脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)(3H-TdR摻入法)初步篩選了組合庫(kù)中84個(gè)化合物的免疫調(diào)節(jié)活性，其中有約50％的化合物和陽(yáng)性對(duì)照藥有相似的免疫調(diào)節(jié)活性；應(yīng)用巨噬細(xì)胞分泌TNF-α實(shí)驗(yàn)(ELISA)初步篩選了其中14個(gè)，有6個(gè)化合物和陽(yáng)性對(duì)照藥有相似的活性，其中3個(gè)化合物(H0402、H0113和H1108)的活性高于陽(yáng)性對(duì)照藥。初步結(jié)果表明我們?cè)O(shè)計(jì)的庫(kù)化合物的結(jié)構(gòu)具有合理性，先導(dǎo)化合物linomide結(jié)構(gòu)中喹啉環(huán)2位的氧代可能不是

8、免疫調(diào)節(jié)活性的必須基團(tuán)。 6.對(duì)化合物的構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了初步的分析，結(jié)果表明：1)在酰胺N原子上的取代基R4為脂肪族化合物時(shí)，免疫調(diào)節(jié)活性可以保留；2)在酰胺N原子上的取代基R3和R4構(gòu)成一個(gè)環(huán)狀化合物時(shí)，免疫調(diào)節(jié)活性顯著減弱；3)在喹啉環(huán)6位引入羧基時(shí)，對(duì)保留所需的免疫調(diào)節(jié)活性是不利的；4)在喹啉環(huán)6-8位上引入鹵素、甲基和甲硫基時(shí)，免疫調(diào)節(jié)活性仍可保留或是更強(qiáng)，如化合物H0113、H0402和H1108的活性高于陽(yáng)性對(duì)照藥。這

9、些結(jié)果有助于進(jìn)一步的藥效團(tuán)分析，為設(shè)計(jì)新結(jié)構(gòu)類型的免疫調(diào)節(jié)劑提供依據(jù)。 本文在文獻(xiàn)研究的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)并合成了一個(gè)包含126個(gè)化合物的組合庫(kù)，庫(kù)中所有化合物均為單一化合物，結(jié)構(gòu)未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道(已申請(qǐng)發(fā)明專利，申請(qǐng)?zhí)?00510063145.7)。應(yīng)用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)庫(kù)化合物進(jìn)行了初篩，結(jié)果表明約有半數(shù)的庫(kù)化合物保留了免疫調(diào)節(jié)活性，其中三個(gè)化合物H0113、H0402和H1108的活性高于陽(yáng)性對(duì)照藥，有進(jìn)一步研究的價(jià)值。基本達(dá)到了預(yù)期的