斑蝥酸鈉抑制人結(jié)腸癌DLD-1細(xì)胞增殖及能量代謝的研究.pdf

1、目的：研究斑蝥酸鈉（Sodium cantharidinate）對人結(jié)腸癌DLD-1細(xì)胞株的抑制作用及其潛在可能機(jī)制，闡明HIF-1α通路對結(jié)腸癌細(xì)胞能量代謝的影響，探索阻斷腫瘤細(xì)胞糖酵解抑制腫瘤生長的有效途徑。
　　方法:根據(jù)處理方式不同，將人結(jié)腸癌DLD-1細(xì)胞分為斑蝥酸鈉組、生理鹽水對照組（0.9％生理鹽水）和空白組，在細(xì)胞和裸鼠層面培養(yǎng)人結(jié)腸癌DLD-1細(xì)胞。以終濃度2ug/ml斑蝥酸鈉作用DLD-1細(xì)胞24h、48h和7

2、2h后，MTT法檢測細(xì)胞的增殖；收集終濃度2ug/ml斑蝥酸鈉處理72h后的DLD-1細(xì)胞，流式細(xì)胞儀（FCM）檢測各組細(xì)胞凋亡和壞死率；收集終濃度2ug/ml斑蝥酸鈉處理后24h、48h和72h的DLD-1細(xì)胞，Western blot法測定細(xì)胞中細(xì)胞色素C（Cyt-C）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(BCL-2)、BAX、Caspase-3，9、P53，缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)蛋白表達(dá)的變化；以0.25mg/kg斑蝥酸鈉腹腔注射裸

3、鼠，次/3天×7次，每次給藥時測量腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線；頸椎脫臼處死裸鼠后，測量腫瘤質(zhì)量，并計(jì)算腫瘤抑制率；對腫瘤組織進(jìn)行 HE染色，觀察腫瘤組織的壞死情況；Western blot法測定腫瘤組織中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（GLUT-1）和乳酸脫氫酶5（LDH-M/5）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.24h、48h、72h的變化趨勢均表現(xiàn)為斑蝥酸鈉組的光密度（OD值）明顯低于對照組及空白組（斑蝥酸鈉組vs對照組，斑蝥酸鈉組vs空白組，

4、P均<0.05），但對照組與空白組的OD值無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；2.細(xì)胞早晚期凋亡率的變化趨勢大致相同，均表現(xiàn)為斑蝥酸鈉組>對照組及空白組（對照組vs空白組，P均>0.05）；3.不同分組 BCL-2、Bax、P53、Caspase3、9、Cyt-C、HIF-1α的蛋白相對表達(dá)量均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均<0.05）。抑凋亡蛋白BCL-2及HIF-1α在培養(yǎng)后各時間點(diǎn)的變化趨勢均一致，表現(xiàn)為對照組、空白組明顯高于斑蝥酸鈉組，但對照組及空白組之間

5、并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與之相反，促凋亡蛋白Bax、P53、Caspase3、9和Cyt-C在培養(yǎng)后24h、48h、72h均表現(xiàn)為斑蝥酸鈉組>對照組、空白組（對照組vs空白組，P均>0.05）；4.斑蝥酸鈉可明顯抑制負(fù)瘤小鼠模型的腫瘤生長。從治療后9天開始，斑蝥酸鈉組的腫瘤體積增長趨勢明顯變平緩，而空白組及對照組小鼠腫瘤體積的上升趨勢明顯較斑蝥酸鈉組明顯。此外，處死小鼠后對腫瘤組織進(jìn)行稱重可知：對照組和空白組瘤重明顯高于斑蝥酸鈉組（P=0.01