復(fù)方藍(lán)芪多糖分離純化工藝優(yōu)化與藥效學(xué)初步研究.pdf

1、本課題將黃芪、板藍(lán)根、淫羊藿按一定比例組成藍(lán)芪復(fù)方，通過提取分離其多糖組分，進(jìn)一步制備成藍(lán)芪免疫增強(qiáng)注射劑，用于豬繁殖與呼吸綜合征（又稱藍(lán)耳病，PRRS）的防治。本文對(duì)復(fù)方藍(lán)芪多糖的提取、分離、純化及免疫藥效進(jìn)行研究，為藍(lán)芪免疫增強(qiáng)注射劑的開發(fā)和研制提供前期基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容如下：
　　1、采用水提醇沉法提取復(fù)方藍(lán)芪多糖，通過單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)優(yōu)化多糖提取工藝，復(fù)方藍(lán)芪多糖的最佳提取工藝為：藍(lán)芪復(fù)方藥材脫脂后，以料液比為1:15

2、，90℃浸提3次，每次2 h，合并提取液，濃縮至0.2 g生藥/mL，離心，上清液加入3倍體積乙醇，醇沉12 h，藍(lán)芪粗多糖提取率為2.24％。
　　2、比較了雙氧水法、樹脂法和活性炭法對(duì)藍(lán)芪多糖的純化效果，并選用活性炭法進(jìn)行工藝優(yōu)化。對(duì)影響活性炭脫色脫蛋白的影響因素，如活性炭用量、多糖溶液pH、脫色時(shí)間、溫度、脫色次數(shù)等進(jìn)行考察，并利用正交設(shè)計(jì)對(duì)純化工藝進(jìn)行優(yōu)化?；钚蕴康募兓に嚍椋核{(lán)芪粗多糖溶液濃度為2~3 mg·mL-1，加

3、入2%（W/V）活性炭粉末，于60℃水浴振蕩30 min，重復(fù)脫色3次，多糖保留率為77.4%，蛋白脫除率為89.6%，脫色率為86.2%。脫色脫蛋白的藍(lán)芪多糖溶液經(jīng)過反復(fù)凍融去除淀粉，透析去除小分子雜質(zhì)，凍干，得到藍(lán)芪純化多糖。經(jīng)凍干得到的產(chǎn)品為類白色，以葡萄糖折算，多糖含量由26.8%提高到46.7%。
　　3、采用DEAE Sephadex A-50陰離子交換柱層析對(duì)藍(lán)芪純化多糖進(jìn)行分級(jí)分離，得到LQ-1、LQ-2、LQ-3

4、三個(gè)組分，其中LQ-2和LQ-3占總多糖的4.4%和68.5%，而LQ-1含量較少。LQ-2和LQ-3經(jīng)Sephadex G100凝膠柱層析進(jìn)一步分離均得到單一洗脫峰。經(jīng)紫外鑒定，LQ-2和LQ-3不含蛋白質(zhì)和和核酸等雜質(zhì)。將LQ-2和LQ-3經(jīng)高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）進(jìn)行純化和測定分子量，LQ-2經(jīng)鑒定為非均一多糖；LQ-3經(jīng)HPGPC分離得到單一尖銳峰，為均一多糖，其數(shù)均分子量為6.34×105。測定粗多糖和純化多糖的多糖分