一種新型乳腺癌標(biāo)志物的評估與檢測.pdf

1、纖維蛋白原(Fibrinogen)是大量存在于血液中的凝結(jié)蛋白它是纖維蛋白的前體，也是血液粘稠度和血液凝結(jié)的重要影響因素。纖維蛋白原(Fibrinogen)α鏈C端的605-629氨基酸組成的分子量為2660Da的多肽片段，簡稱Fib-α[605-629]。近期有美國哈佛大學(xué)的研究者報(bào)道，利用質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析證明乳腺癌病人血液中的Fib-α[605-629]含量與正常人血液中的含量存在非常顯著的差異，乳腺癌病人血液中的該多肽含量

2、要低于正常人的指數(shù)，而乳腺癌病人手術(shù)后血液中該多肽含量可恢復(fù)正常水平。因此該研究建議Fib-α[605-629]多肽可成為乳腺癌診斷及預(yù)后恢復(fù)情況的一種新的標(biāo)志物。然而由于缺乏合適的檢測工具，該多肽作為乳腺癌標(biāo)志物的可靠性和臨床應(yīng)用的可行性尚無法得到進(jìn)一步的驗(yàn)證。
　　 本課題旨在通過利用單克隆抗體技術(shù)建立一種ELISA檢測方法，對Fib-α[605-629]多肽片段作為新型乳腺癌血液標(biāo)志物的可靠性和可行性進(jìn)行論證。我們率先獲得

3、了4株來自不同親本、穩(wěn)定分泌特異性抗Fib-α[605-629]多肽的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。我們從中挑選出一株親和力、特異性最好的抗Fib-α[605-629]多肽的單克隆抗體用于ELISA方法的建立。我們通過實(shí)驗(yàn)選擇出了一種可行的競爭ELISA的方案，利用辣根過氧化物酶(HRP)對該單克隆抗體進(jìn)行了標(biāo)記，通過反復(fù)測試確定了競爭ELISA檢測方法所使用的抗原、抗體的最佳組合，并對包被條件，封閉液，反應(yīng)時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。

4、>　　 最后，應(yīng)用我們建立的競爭ELISA檢測方法對90個(gè)正常人和89個(gè)乳腺癌病人的血清進(jìn)行了檢測，數(shù)據(jù)分析表明乳腺癌病人血清中的Fib-α[605-629]多肽含量與正常人血清的含量相比有所降低，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示差異顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)ib-α[605-629]多肽在乳腺癌和正常人血清中含量有顯著差異，該多肽有望成為可用于乳腺癌診斷的一種標(biāo)志物;而且，本實(shí)驗(yàn)建立的競爭ELISA檢測方法對于乳腺癌疾病的診斷有一定的參考意義。