臍血樹(shù)突狀細(xì)胞及BGC823衍生exosomes誘導(dǎo)抗腫瘤活性的研究.pdf

1、胃癌是常見(jiàn)的嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，傳統(tǒng)的治療手段難以達(dá)到防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的目的而療效欠佳。生物治療，尤其是腫瘤疫苗已為許多惡性腫瘤患者帶來(lái)了希望，腫瘤疫苗也因此成為腫瘤治療和研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。大量的文獻(xiàn)已證實(shí)用滅活的腫瘤細(xì)胞、腫瘤裂解物或腫瘤抗原蛋白、肽或DNA做為腫瘤疫苗，同時(shí)配合使用細(xì)胞因子或佐劑能產(chǎn)生免疫學(xué)效應(yīng)以及臨床療效。然而，這些疫苗的免疫效應(yīng)通常較弱，臨床觀察很少能達(dá)到長(zhǎng)期的、穩(wěn)定的治療效應(yīng)。 樹(shù)突狀細(xì)胞(DC

2、s)是目前已知的功能最強(qiáng)大的加工和呈遞抗原的專職APC，也是惟一能激活初始型T細(xì)胞的APC，它決定著特異性免疫應(yīng)答對(duì)抗原的選擇性并提供共刺激信號(hào)，能有效的活化CD8+CTL，產(chǎn)生體內(nèi)外抗腫瘤效應(yīng)，在腫瘤細(xì)胞免疫和體液免疫中均發(fā)揮重要作用。1998年Zitvogel課題組在DCs抗腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)，DCs能向細(xì)胞外分泌直徑為40-90nm的雙層膜性囊泡小體，命名為DCs衍生的exosomes。對(duì)exosomes生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn)，exoso

3、mes表達(dá)幾乎所有的抗原提呈分子，包括MHCI、MHCⅡ類分子和CDla-d，還表達(dá)協(xié)同刺激分子如CD86、CD80以及粘附分子CDllc、CD54等；另外，與DCs相比exosomes還具有耐高溫、可冷藏、性能穩(wěn)定、可定量分析等特點(diǎn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，DC來(lái)源的exosomes(DEX)作為腫瘤疫苗使用，不僅可防止腫瘤進(jìn)展，而且能使已形成的腫瘤體積顯著縮小，甚至可達(dá)到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)腫瘤消退的目的。 2001年WolfersJ等在N

4、atMed雜志報(bào)道了腫瘤衍生的exosomes(TEX)是引起CTL交叉活化的腫瘤排斥抗原的來(lái)源之一。曹雪濤領(lǐng)導(dǎo)的課題組也對(duì)某些腫瘤細(xì)胞株來(lái)源的exosomes進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)exosomes不僅含有MHCI、MHCⅡ類分子、B7分子和CD54分子，而且還含有多種趨化因子，對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行exosomes接種，顯示出良好的誘導(dǎo)特異性抗腫瘤效應(yīng)和交叉免疫保護(hù)效應(yīng)。 有研究報(bào)道，臍血DCs的MHC分子及共刺激分子、粘附分子的表達(dá)量明顯

5、低于外周血來(lái)源的DCs，但目前尚未見(jiàn)臍血來(lái)源DCs分泌exosomes相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，也未見(jiàn)到人胃癌BGC823細(xì)胞分泌exosomes的相關(guān)報(bào)道。本課題旨在尋找新的exosomes來(lái)源，對(duì)其產(chǎn)生、分離純化、生物學(xué)特性及其功能調(diào)節(jié)和抗腫瘤效應(yīng)等進(jìn)行探討，為exosomes的臨床應(yīng)用治療腫瘤打下理論基礎(chǔ)。 方法(略) 本研究全面探討了臍血DCs的形態(tài)特征、細(xì)胞表面標(biāo)志特征和誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖和CTL的特異性殺傷能力。并首次研究報(bào)

6、道了臍I[ⅡDCs分泌exosomes，并對(duì)exosomes的蛋白帶型、超微結(jié)構(gòu)和形態(tài)以及激活T細(xì)胞的能力等方面進(jìn)行了研究。研究證實(shí)，適當(dāng)?shù)捏w外誘導(dǎo)和腫瘤抗原負(fù)載，可從臍血中誘導(dǎo)出具有顯著抗腫瘤活性的DCs，并能從其培養(yǎng)上清中成功分離出具有同等抗腫瘤效應(yīng)的exosomes。本研究結(jié)果為腫瘤疫苗的研究提供了新的DCs及其亞單位成分exosome的來(lái)源，為體外獲得足夠量的DCs及其衍生exosomes疫苗，用于有效的臨床治療提供了新的理論基

7、礎(chǔ)。本文還對(duì)DEX和TEX進(jìn)行了對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)兩者在攜帶抗原提呈分子等方面有相似之處，體內(nèi)外試驗(yàn)也證實(shí)它們都能有效活化T細(xì)胞、并使其產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)。此外，本文還首次探討了人類新型細(xì)胞因子CKLF和CKLFSF8在臍血1)Cs和人胃癌細(xì)胞BGC823的表達(dá)，并通過(guò)轉(zhuǎn)染發(fā)現(xiàn)CKLFSF8在BGC823細(xì)胞過(guò)表達(dá)使細(xì)胞表面EGFR表達(dá)降低，且對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有直接毒性作用。 結(jié)論： 1.人臍血中可誘導(dǎo)出具有免疫刺激活性的樹(shù)突狀細(xì)