皮膚惡性黑素瘤組織中乙酰肝素酶和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及意義.pdf

1、惡性黑素瘤(malignantmelanoma，MM)簡(jiǎn)稱惡黑，是一種高度惡性的腫瘤，多發(fā)生于皮膚，稱為皮膚惡性黑素瘤(cutaneousmalignantmelanoma，CMM)，發(fā)病率占皮膚惡性腫瘤的第三位(6.8％～20％)。在我國(guó)的發(fā)病率雖然較低，但由于其死亡率高，且近年來(lái)發(fā)病有逐年上升的趨勢(shì)以及對(duì)其認(rèn)知的嚴(yán)重不足，患者就診時(shí)往往為時(shí)已晚。部分CMM由于組織像不典型，因此主要用免疫組化的方法對(duì)該腫瘤進(jìn)行鑒別。 交界痣和

2、皮內(nèi)痣都是色痣的一種，屬于黑素細(xì)胞系統(tǒng)的“良性腫瘤”。皮內(nèi)痣一般較穩(wěn)定，不易發(fā)生惡變，而交界痣不穩(wěn)定，較易發(fā)生惡變，其機(jī)制尚不清楚。 惡性腫瘤具有浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的特性，這已被許多實(shí)驗(yàn)證明。惡性腫瘤成為人類致命的疾病，不僅僅在于惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)失去控制，更在于其具有轉(zhuǎn)移的能力，而轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤細(xì)胞往往是真正的“殺手”。目前，對(duì)CMM的治療方法仍不理想，對(duì)其發(fā)病機(jī)制還不清楚。惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，即其進(jìn)入血管以及再穿出血管進(jìn)入其它組織，

3、其必須穿過(guò)細(xì)胞層以及環(huán)繞在細(xì)胞層外的稠密基質(zhì)。細(xì)胞外基質(zhì)(extracellulermatrices，ECM)和血管基底膜(basementmembrane，BM)中含有大量硫酸類肝素，可以封阻惡性腫瘤細(xì)胞移動(dòng)。而新近發(fā)現(xiàn)的乙酰肝素又稱硫酸乙酰肝素多聚糖，是一種蛋白聚糖類碳水化合物，為廣泛存在于脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物組織ECM和細(xì)胞表面的生物大分子，是BM的主要構(gòu)成分。它能與細(xì)胞表面及ECM中的活性分子結(jié)合，黏附于細(xì)胞表面是ECM聚集和穩(wěn)

4、定的基礎(chǔ)。乙酰肝素酶(heparanase，Hpa)實(shí)際上是一種葡萄糖醛酸酯酶，是一個(gè)關(guān)鍵胞外基質(zhì)降解酶，它能降解硫酸乙酰肝素和乙酰肝素蛋白多聚糖上的聚糖側(cè)鏈，在腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起重要的作用，尤其是腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，都與Hpa的表達(dá)和/或過(guò)表達(dá)有關(guān)。 腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的形成，近年來(lái)對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)及其受體有許多具有重要意義的研究。V

5、EGF可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管生成，增加血管通透性，影響血液動(dòng)力學(xué)等。目前研究表明，VEGF是促進(jìn)腫瘤血管生成最主要的因子，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用。 CD105(endoglin)參與血管生成的過(guò)程，是新生血管的標(biāo)志，而血管生成是實(shí)體腫瘤普遍存在的特征，與腫瘤組織的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。CD105不僅是內(nèi)皮細(xì)胞增殖的標(biāo)志，并且主要在未成熟血管上表達(dá)。故由CD105標(biāo)記來(lái)測(cè)定微血管密度(microvesseldens

6、ity，MVD)，來(lái)判斷血管生成狀態(tài)是理想的指標(biāo)。 以黑素細(xì)胞系統(tǒng)的良性病變皮內(nèi)痣、交界痣為對(duì)照，更深入研究CMM發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，并進(jìn)一步認(rèn)識(shí)其生物學(xué)特性，以便更有效地指導(dǎo)臨床治療是當(dāng)前研究的重要內(nèi)容。本研究旨在進(jìn)一步深入研究CMM的分子生物學(xué)特性，以便盡早揭示CMM的發(fā)病機(jī)制。 材料與方法：選用鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科1999年1月～2005年6月CMM、交界痣、皮內(nèi)痣石蠟標(biāo)本，其中CMM30例，交界痣19例，

7、皮內(nèi)痣20例。以上標(biāo)本均由鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理副教授以上職稱醫(yī)師診斷。其中，CMM組：男56.67％(17例/30例)，女43.33％(13例/30例)；年齡17歲～77歲，平均52.50±14.663歲，＜40歲20％(6例/30例)，＞40歲80％(24例/30例)；其中原位CMM5例，無(wú)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM19例，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM6例；原發(fā)部位中，肢端最多46.67％(14例/30例)；交界痣組：男47

8、.37％(9例/19例)，女52.63％(10例/19例)；年齡1歲～68歲，平均27.11±21.356歲；皮內(nèi)痣組：男60％(12例/20例)，女40％(8例/20例)；年齡3歲～54歲，平均28.40±15.656歲。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)的方法，分別檢測(cè)CMM、交界痣、皮內(nèi)痣中Hpa和VEGF的表達(dá)情況及MVD，并研究分析其相互關(guān)系。所測(cè)數(shù)據(jù)使用SPSS11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料計(jì)算陽(yáng)性率；計(jì)量資料用單樣本K-S檢驗(yàn)(

9、Kolmogorov-Smirnov)，用(-x)±s表示；陽(yáng)性率之間的比較用計(jì)數(shù)資料的x2檢驗(yàn)(Chi-square)；三組間表達(dá)強(qiáng)度的比較用方差分析(AnalysisofVariance)；計(jì)量資料相關(guān)性用二元變量的相關(guān)分析(Pearson)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果：1.Hpa的表達(dá)1.1陽(yáng)性率的比較Hpa在CMM組、交界痣組和皮內(nèi)痣組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為70％(21例/30例)、31.58％(6例/19例)和35％(

10、7例/20例)，CMM組與交界痣組Hpa的陽(yáng)性表達(dá)率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.941，P=0.008)；CMM組與皮內(nèi)痣組Hpa的陽(yáng)性表達(dá)率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.966，P=0.015)；交界痣組與皮內(nèi)痣組Hpa的陽(yáng)性表達(dá)率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.051，P=0.821)。 1.2表達(dá)強(qiáng)度的比較Hpa在CMM組、交界痣組和皮內(nèi)痣組中的表達(dá)強(qiáng)度分別為：3.83±2.069、2.32±1.827和2.20±1.508，C

11、MM組與交界痣組Hpa的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007)；CMM組與皮內(nèi)痣組Hpa的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)；交界痣組與皮內(nèi)痣組Hpa的表達(dá)強(qiáng)度比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.846)。 2.VEGF的表達(dá)2.1陽(yáng)性率的比較VEGF在CMM組、交界痣組和皮內(nèi)痣組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.33％(19例/30例)、26.32％(5例/19例)和25％(5例/20例)，CMM組與交界痣組VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率比較

12、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.379，P=0.012)；CMM組與皮內(nèi)痣組VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.065，P=0.008)；交界痣組與皮內(nèi)痣組VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.009，P=0.925)。 2.2表達(dá)強(qiáng)度的比較VEGF在CMM組、交界痣組和皮內(nèi)痣組中的表達(dá)強(qiáng)度分別為：3.17±1.821、2.11±1.629和2.10±1.410，CMM組與交界痣組VEGF的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

13、(P=0.033)；CMM組與皮內(nèi)痣組VEGF的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.029)；交界痣組與皮內(nèi)痣組VEGF的表達(dá)強(qiáng)度比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.992)。 3.MVDCMM組MVD為11.07±1.552，交界痣組MVD為6.11±1.629，皮內(nèi)痣組MVD為5.80±1.281。CMM組與交界痣組MVD比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；CMM組與皮內(nèi)痣組MVD比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；交界痣組與皮內(nèi)痣組M

14、VD比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.528)。 4.Hpa與VEGF相關(guān)性在CMM組織中，Hpa指標(biāo)陽(yáng)性表達(dá)率為70％(21例/30例)，其表達(dá)強(qiáng)度為：3.83±2.069；VEGF指標(biāo)陽(yáng)性表達(dá)率為63.33％(19例/30例)，其表達(dá)強(qiáng)度為：3.17±1.821。二者表達(dá)的強(qiáng)度經(jīng)二元變量的相關(guān)分析顯示，Hpa指標(biāo)與VEGF指標(biāo)表達(dá)顯著正相關(guān)(r=0.736，P＜0.001)。 5.Hpa和VEGF與CMM浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系5.

15、1Hpa與CMM浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系原位CMM組與無(wú)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組Hpa的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；原位CMM組與伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組Hpa的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；無(wú)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組與伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組Hpa的表達(dá)強(qiáng)度比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.061)。 5.2VEGF與CMM浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系原位CMM組與無(wú)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組VEGF的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00

16、1)；原位CMM組與伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組VEGF的表達(dá)強(qiáng)度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；無(wú)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組與伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM組VEGF的表達(dá)強(qiáng)度比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.198)。 結(jié)論：1.CMM較交界痣及皮內(nèi)痣中Hpa、VEGF和MVD明顯高表達(dá)，提示Hpa和VEGF的過(guò)表達(dá)可能參與了CMM的發(fā)生、發(fā)展；CMM的侵襲性可能與微血管形成有關(guān)。 2.CMM中Hpa表達(dá)與VEGF表達(dá)顯著正相關(guān)，提示H

17、pa和VEGF在CMM的侵襲中的作用可能存在一定的關(guān)聯(lián)性或協(xié)同作用，聯(lián)合檢測(cè)Hpa和VEGF在CMM中的表達(dá)情況，有助于CMM浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移機(jī)制的探討。 3.無(wú)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM及伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM與原位CMM相比Hpa和VEGF均明顯高表達(dá)，提示Hpa和VEGF的過(guò)表達(dá)可能和CMM的浸潤(rùn)有關(guān)。 4.無(wú)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM及伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移侵襲性CMM中Hpa和VEGF表達(dá)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示尚不能認(rèn)為Hpa和VEGF與C