奶牛囊腫黃體及不同時(shí)期妊娠黃體差異蛋白組學(xué)研究.pdf

1、黃體作為一個(gè)暫時(shí)的分泌器官組織對(duì)于奶牛繁殖至關(guān)重要，對(duì)于發(fā)情周期的形成、早期妊娠、早期胚胎的入植、胚胎的維持、妊娠狀態(tài)的調(diào)節(jié)都有重要的意義。通過(guò)對(duì)黃體蛋白質(zhì)表達(dá)及潛在功能分析，可為揭示黃體在奶牛生殖生理過(guò)程中的作用機(jī)理提供了一種新的研究角度。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)雙向電泳技術(shù)建立黃體蛋白表達(dá)圖譜，通過(guò)PDQuest8.0軟件對(duì)圖譜進(jìn)行分析，分別比較不同黃體間的差異蛋白，并對(duì)差異蛋白斑點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
　　通過(guò)比較不同制備方法、不同規(guī)格IPG膠

2、條、不同濃度SDS-PAGE膠濃度，優(yōu)化試驗(yàn)條件和相關(guān)的參數(shù)，建立奶牛黃體雙向電泳蛋白圖譜。最終選定TCA-丙酮沉淀法制各樣品，18 cmpH4～7的IPG膠條及12％的SDS-PAGE凝膠濃度，得到了高質(zhì)量的蛋白點(diǎn)，分離得到1071個(gè)左右的蛋白點(diǎn)的奶牛黃體蛋白2-DE圖譜。
　　通過(guò)雙向電泳技術(shù)，對(duì)正常黃體和發(fā)生囊腫黃體組織進(jìn)行分析，分析獲取8個(gè)差異蛋白點(diǎn)，質(zhì)譜成功鑒定出6個(gè):α-1-酸性蛋白，膠質(zhì)酸性蛋白，核磷蛋白，牛血清白蛋

3、白晶體結(jié)構(gòu)A鏈，絲氨酸蛋白酶抑制蛋白，泛素羧基末端水解酶，其中α-1-酸性蛋白可能與黃體囊腫發(fā)生或相關(guān)組織造成的炎癥反應(yīng)有關(guān)，膠質(zhì)纖維酸性蛋白可能與黃體囊腫造成的激素分泌的異常有關(guān)，核磷蛋白本身不僅參與卵巢正常的生理生化過(guò)程還可能參與了黃體囊腫的發(fā)生，泛素羧基末端水解酶可能與卵巢的發(fā)育和卵黃的發(fā)育有關(guān)。
　　通過(guò)雙向電泳技術(shù)對(duì)不同時(shí)期黃體進(jìn)行研究，將黃體分為未妊娠黃體組、妊娠三個(gè)月黃體組和妊娠六個(gè)月黃體組，成功鑒定出了6種蛋白質(zhì):

4、26s蛋白酶體非酶調(diào)節(jié)亞基蛋白，纖維蛋白原γ多肽，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶蛋白，核纖層蛋白β，硫氧還原蛋白，微管蛋白β-5鏈，26s蛋白酶體調(diào)節(jié)亞基蛋白可能與妊娠胚胎的早期活動(dòng)有關(guān)，纖維蛋白原γ可能與妊娠的維持作用有關(guān)，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可能與黃體的形成有關(guān)，核纖層蛋白隨著妊娠期的增長(zhǎng)表達(dá)量在減少可能與黃體細(xì)胞的活性有關(guān)，硫氧還原蛋可能與黃體的維持調(diào)控有關(guān)。
　　本研究建立并優(yōu)化了奶牛黃體蛋白雙向電泳技術(shù)體系，為黃體蛋白差異蛋白組學(xué)研究奠定