淺低溫通過(guò)上調(diào)PI3K-Akt信號(hào)通路活性增加大鼠腦缺血再灌注損傷過(guò)程中海馬CA1區(qū)GLT-1表達(dá).pdf

1、近年來(lái)，腦卒中成為嚴(yán)重威脅任人類的身體健康和生存質(zhì)量的一種缺血性疾病，但作為主要治療后的再灌注可能會(huì)進(jìn)一步加重大腦損傷。腦缺血再灌注（I/R）后可引起嚴(yán)重的神經(jīng)功能損傷，導(dǎo)致身體功能的缺損或者殘缺。這使得缺血再灌注后的腦保護(hù)成為臨床研究的重點(diǎn)，而淺低溫（32-35℃）可起到有效減少缺血再灌注后損傷的作用，但其具體的作用機(jī)制還有待深入研究。
　　研究發(fā)現(xiàn)，磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B（PI3K/Akt）信號(hào)通路與腦缺血缺氧再灌

2、注過(guò)程中的抗凋亡作用相關(guān)，可以調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、增殖、分化等。谷氨酸作為神經(jīng)系統(tǒng)中一種重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)與腦缺血缺氧再灌注的興奮性神經(jīng)毒作用相關(guān)，而谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1（GLT-1）在降低細(xì)胞外液谷氨酸濃度中作用顯著。
　　目的：
　　觀察淺低溫在腦缺血再灌注的腦保護(hù)過(guò)程中，大鼠海馬CA1區(qū)PI3K/Akt信號(hào)通路和GLT-1表達(dá)之間的關(guān)系，為臨床研究與治療提供新思路和理論依據(jù)。
　　方法：
　　1選用健康成年雄

3、性wistar大鼠134只。
　　2采用四血管阻斷法建立腦缺血再灌注模型，利用鼻咽腔降溫法制備淺低溫模型。
　　3根據(jù)大鼠是否進(jìn)行淺低溫處理與側(cè)腦室注射藥物GLT-1功能拮抗劑二氫卡因酸鹽（DHK）、PI3K抑制劑LY294002、DHK溶劑生理鹽水NS、LY294002溶劑DMSO的不同，將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照(C)組，假手術(shù)(S)組，常溫缺血再灌注(NI/R)組，淺低溫再灌注(HI/R)組，淺低溫DHK側(cè)腦室注射(HI/

4、R+DHK)組，淺低溫LY側(cè)腦室注射(HI/R+LY)組，淺低溫NS側(cè)腦室注射(HI/R+NS)組，淺低溫DMSO側(cè)腦室注射(HI/R+DM)組。C組8只，其余組每組18只；C組不做處理；S組只在第一天暴露翼狀小孔，2天后分離暴露頸動(dòng)脈；NI/R組第一天永久性凝閉椎動(dòng)脈，2天后常溫下夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈8min，恢復(fù)再灌注；HI/R組第一天凝閉椎動(dòng)脈，2天后，先鼻咽腔降溫至海馬溫度（32-35℃），再夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈8min，恢復(fù)再灌注，繼

5、續(xù)低溫2h，然后自然復(fù)溫；剩余組在鼻咽腔降溫至目標(biāo)溫度前30min側(cè)腦室注射相應(yīng)藥物，其他處理同HI/R組，低溫期間保持肛溫在37℃左右。
　　4每組取8只大鼠在缺血再灌注后7天進(jìn)行斷頭取腦，進(jìn)行病理學(xué)分析。
　　5剩余大鼠均在缺血再灌注后8h時(shí)斷頭取腦，動(dòng)物左右兩側(cè)大腦分別用于免疫組化和western blot。
　　6免疫組化染色檢測(cè)CA1區(qū)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平以明確細(xì)胞凋亡水平；應(yīng)用免疫組化、Weste

6、rn blot技術(shù)檢測(cè)CA1區(qū)PAkt、GLT-1蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1神經(jīng)病理學(xué)評(píng)價(jià)
　　腦組織硫堇染色顯示，C組海馬CA1區(qū)椎體神經(jīng)元排列緊密整齊，有2-3層，形態(tài)規(guī)則完整，細(xì)胞核大且圓，核仁清楚。與C組相比，S組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元無(wú)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡（DND），神經(jīng)元濃密度(ND)未發(fā)生明顯變化（P＞0.05）。與S組相比，HI/R組、HI/R+NS組、HI/R+DM組，海馬CA1區(qū)神經(jīng)元均無(wú)明顯DND

7、，ND均未發(fā)生明顯變化（P＞0.05）。I/R組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元幾乎全部死亡，與S組相比，ND值有意義，（P＜0.05）。HI/R+NS組與HI/R+DHK組相比，HI/R+DM組與HI/R+LY組相比，HI/R+DHK組、HI/R+LY組神經(jīng)元發(fā)生明顯死亡，ND值減小(P＜0.05)。
　　2比較CA1區(qū)Bax、Bcl-2的變化
　　與S組相比，其余組Bax、Bcl-2蛋白均增加（P<0.05）；與I/R組相比，HI

8、/R組、HI/R+NS組和HI/R+DM組Bax蛋白表達(dá)減少，Bcl-2增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與HI/R組相比，HI/R+DHK組、HI/R+LY組Bax蛋白表達(dá)增多，Bcl-2減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HI/R+NS組與HI/R+DHK組相比，HI/R+DM組與HI/R+LY組相比，HI/R+DHK組和HI/R+LY組 Bax蛋白表達(dá)增加， Bcl-2減少，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與I/R

9、組相比，HI/R+DHK組、HI/R+LY組，Bax表達(dá)減少， Bcl-2蛋白表達(dá)增多（P<0.05）；HI/R+DHK組與HI/R+LY組相比，Bax表達(dá)較少，Bcl-2表達(dá)較多（P<0.05）。
　　3比較CA1區(qū)PAkt蛋白的變化
　　與S組相比，其余組PAkt蛋白表達(dá)增加（P<0.05）；與I/R組相比， HI/R組、HI/R+NS組和HI/R+DM組PAkt蛋白表達(dá)增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與HI/

10、R組相比，HI/R+LY組PAkt蛋白減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HI/R+DM組與HI/R+LY組相比，HI/R+LY組 PAkt蛋白表達(dá)減少，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與HI/R組相比，HI/R+DHK組P-Akt蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.比較CA1區(qū)GLT-1蛋白的變化
　　與S組相比，其余組GLT-1蛋白增加（P<0.05）；與I/R組相比，HI/R組、HI/R+NS組和H

11、I/R+DM組GLT-1蛋白表達(dá)增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與HI/R+LY組相比，HI/R組、HI/R+DM組、HI/R+NS組GLT-1蛋白表達(dá)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與HI/R+DHK組相比，HI/R組和GLT-1蛋白表達(dá)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與HI/R+DHK組相比，HI/R+LY組GLT-1蛋白表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1頭部淺低溫可減少缺