G1后期細胞易被Fas誘導凋亡的機制研究.pdf

1、目的：
　　課題小組前期研究發(fā)現(xiàn)G1后期細胞易被Fas誘導凋亡，本研究通過Hoechst33342染料對細胞DNA進行染色，通過流式細胞儀分選出高純度G0/G1期和S期細胞。分別測定G0/G1期細胞和S期細胞中抑制凋亡分子的表達來闡明G1后期細胞易被Fas誘導凋亡的機制。本研究的意義在于從分子水平闡明凋亡與細胞周期之間的內(nèi)在關系，闡明細胞凋亡窗口期的分子機制。
　　方法：
　　利用Hoechst33342染料分別對MM

2、L-1、PEER淋巴瘤細胞進行DNA染色，通過流式細胞儀分選出細胞的DNA倍數(shù)不同的G0/G1期和S期細胞，對照組為未分選組。測定G0/G1期細胞、S期細胞和未分選組細胞Fas（終濃度50ng/ml）誘導凋亡（0hr、2hr、4hr）時的細胞凋亡率。通過超聲裂解法提取G0/G1期細胞、S期細胞和未分選組細胞胞漿蛋白，Western blotting測定抑制凋亡分子FLIP、Bcl-2的表達。
　　結(jié)果：
　　（1） MML-

3、1、PEER細胞Fas誘導凋亡時的細胞凋亡率結(jié)果：MML-1、PEER細胞G0/G1期及S期分別經(jīng)Fas誘導凋亡0hr、2hr、4hr后測定細胞凋亡率。MML-1分選后S期細胞在Fas誘導凋亡0hr、2hr、4hr的凋亡率分別為27.8％，32.4%和45.4%；而分選后G0/G1期的凋亡率分別為18.9%，29.0%和30.3%。S期細胞較G0/G1期細胞易被Fas誘導凋亡。PEER分選后S期細胞在Fas誘導凋亡0hr、2hr、4hr

4、的凋亡率分別為37.2%，52.8%和73.4%；而分選后G0/G1期的凋亡率分別為40.7%，48.2%和63.5%。從凋亡率可以判斷S期細胞較G0/G1期細胞更易被Fas誘導凋亡。
　?。?）MML-1、PEER細胞FLIP蛋白表達結(jié)果：FLIP蛋白在G0/G1期細胞的表達較S期細胞、未分選組細胞顯著增加，S期細胞和未分選組細胞的FLIP蛋白表達無明顯差異。FLIP蛋白的表達在G0/G1期最高，細胞進入S期后表達降低。

5、　?。?）MML-1、PEER細胞Bcl-2蛋白表達結(jié)果：Bcl-2蛋白在G0/G1期細胞的表達較S期細胞、未分選組細胞顯著降低，S期細胞和未分選組細胞的Bcl-2蛋白表達無明顯差異。Bcl-2蛋白的表達在G0/G1期最低，細胞進入S期后表達增多。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)，S期細胞較G0/G1期細胞易被Fas誘導凋亡。細胞凋亡抑制分子FLIP蛋白水平在G1后期迅速下調(diào)，而分子Bcl-2蛋白水平在G1后期迅速回調(diào)。FLIP