聯(lián)合應用BMP-2和BMP-7對大鼠乳鼠成骨細胞生物學活性的影響.pdf

1、目的： ①建立一種簡單，快速，成活率和純度高的原代成骨細胞培養(yǎng)方法，以獲得大量成骨細胞，為骨組織工程研究奠定基礎。 ②探討聯(lián)合應用骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7（BMP-7）對成骨細胞生物學活性的影響。 方法： ①無菌采取5日齡SD大鼠的顱蓋骨，采用改良的二次酶消化法分離成骨細胞，通過倒置相差顯微鏡觀察，并用堿性磷酸酶和礦化結節(jié)染色鑒定，利用微量滴定（MTT）法測定一個培養(yǎng)周期的成骨

2、細胞活性分布。 ②培養(yǎng)的成骨細胞單獨應用BMP-2和BMP-7以及聯(lián)合應用BMP-2和BMP-7作用48h后，用MTT法檢測成骨細胞增殖，同時測定成骨細胞裂解液中堿性磷酸酶（ALP）活性和骨鈣素（OCN）含量。 結果： ①倒置相差顯微鏡形態(tài)觀察結果顯示：未貼壁的細胞呈圓形，貼壁生長的細胞呈不規(guī)則梭形、三角形或多角形，單核，有1～3個核仁；堿性磷酸酶和鈣化結節(jié)染色均呈陽性（陽性率≥98．06%）；MTT法結合形態(tài)學

3、觀察結果顯示，成骨細胞培養(yǎng)至第10d時活性最強。 ②單獨應用BMP-2和BMP-7，聯(lián)合應用BMP-2和BMP-7作用48h后，均能刺激大鼠乳鼠成骨細胞的增殖，增加成骨細胞ALP活性和OCN含量。聯(lián)合應用BMP-2和BMP-7作用后，與對照組，單獨應用BMP-2和BMP-7組比較，能明顯增強成骨細胞生物學活性，統(tǒng)計學分析，有顯著差異性，P<0．05。 結論： ①用改良的二次酶消化法能夠在短時間內獲得大量成骨細胞，