前列腺癌雄激素非依賴轉(zhuǎn)化中TRPV6對神經(jīng)內(nèi)分泌分化的影響.pdf

1、目的:
　　通過小干擾RNA(siRNA)技術(shù)沉默前列腺癌細胞中TRPV6基因,初步探討TRPV6對前列腺癌細胞增殖和侵襲力的影響及其在前列腺癌雄激素非依賴轉(zhuǎn)化過程中神經(jīng)內(nèi)分泌分化的作用。
　　方法:
　　(1)體外培養(yǎng)雄激素依賴性前列腺癌細胞(LNCaP)及雄激素非依賴性前列腺癌細胞(PC-3),檢測兩種細胞中 TRPV6的表達情況。通過 siRNA沉默TRPV6基因,檢測前列腺癌細胞中TRPV6基因的表達,并篩選、

2、鑒定轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的LNCaP細胞。
　　(2)選取轉(zhuǎn)染成功的LNCaP細胞并設(shè)定實驗組(轉(zhuǎn)染siRNA-TRPV6)、陰性對照組(轉(zhuǎn)染siRNA-NC)和空白對照組(只加轉(zhuǎn)染劑)三組進行對照實驗,通過MTT檢測細胞增殖的影響及 Transwell檢測細胞侵襲力的變化情況,同時通過熒光定量PCR及western-Blot檢測神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達情況。
　　(3)利用 SPSS19.0軟件系統(tǒng)建立數(shù)據(jù)庫和進行統(tǒng)計學(xué)分

3、析,對比研究TRPV6對前列腺癌LNCaP細胞生物學(xué)特征變化的作用。
　　結(jié)果:
　　1、熒光定量 PCR結(jié)果顯示:前列腺癌雄激素依賴性細胞株與前列腺癌雄激素非依賴性細胞株中均存在TRPV6基因的表達,兩者之間表達無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　2、轉(zhuǎn)染 TRPV6-siRNA后實驗結(jié)果顯示:與陰性對照組及空白組相比,實驗組的TRPV6呈現(xiàn)低表達,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。通過MTT、Transwell等

4、分子生物學(xué)方法檢測提示:與陰性對照組及空白組對比,實驗組細胞增殖及侵襲力較其他二組均有抑制(P<0.05),而陰性對照組與空白組之間則無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　3、熒光定量 PCR及 western-Blot檢測實驗組中的神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)低于陰性對照組與空白組(P<0.05),而陰性對照組與空白組的表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),提示TRPV6與前列腺癌雄激素非依賴轉(zhuǎn)化中的神經(jīng)內(nèi)分泌分化存在一定程度正相關(guān)