水稻干尖線蟲和菊花葉枯線蟲的LAMP檢測(cè)方法研究.pdf

1、水稻干尖線蟲（Aphelenchoides besseyiChristie，1942）和菊花葉枯線蟲（Aphelenchoides ritzemabosi(Schwartz，1911)Steiner&Buhrer，1932）同為滑刃屬（Aphelenchoides Fischer，1984）的重要植物病原線蟲，能分別危害多種作物，是一些國(guó)家或地區(qū)的植物檢疫性有害生物。滑刃屬線蟲形態(tài)相似，傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法鑒定困難、操作復(fù)雜、耗時(shí)耗力，對(duì)檢測(cè)

2、鑒定人員的專業(yè)水平要求程度高，在檢疫和監(jiān)測(cè)工作中迫切需要具備這兩種線蟲的分子檢測(cè)鑒定技術(shù)。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）具有快速、檢測(cè)結(jié)果肉眼可見(jiàn)、不需要特殊儀器的特點(diǎn)。本研究基于水稻干尖線蟲和菊花葉枯線蟲的18S核糖體RNA基因分別設(shè)計(jì)對(duì)這2種線蟲進(jìn)行LAMP的特異引物，并利用這2個(gè)LAMP引物研究建立具有特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、靈敏度高和可操作性強(qiáng)的水稻干尖線蟲和菊花葉枯線蟲LAMP檢測(cè)方法，研究結(jié)果如下。
　　獲得了水稻干尖線蟲LA

3、MP引物 B77t和菊花葉枯線蟲LAMP引物R81t，B77t包括了一對(duì)外引物、一對(duì)內(nèi)引物和一對(duì)環(huán)引物共六條引物，R81t包括了一對(duì)外引物、一對(duì)內(nèi)引物和一條環(huán)引物共五條引物；建立了基于引物B77t和引物R81t并采用鈣黃綠素染料檢測(cè)LAMP反應(yīng)結(jié)果的水稻干尖線蟲LAMP和菊花葉枯線蟲LAMP檢測(cè)方法。利用這2種線蟲的LAMP檢測(cè)方法能分別從不同目、不同科、不同屬以及同屬不同種類的線蟲中特異的檢測(cè)出水稻干尖線蟲和菊花葉枯線蟲，能穩(wěn)定的檢測(cè)

4、鑒定同種線蟲的不同種群以及不同發(fā)育蟲態(tài)的個(gè)體，對(duì)水稻干尖線蟲和菊花葉枯線蟲的檢測(cè)靈敏度分別達(dá)到1/1000和1/100單條蟲DNA；另外，這2個(gè)LAMP檢測(cè)方法，還成功從種類混合的線蟲樣品中和植物組織樣品中直接檢測(cè)目的線蟲，可以省略分離線蟲的步驟，達(dá)到簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和快速鑒定的目的。
　　本研究為水稻干尖線蟲和菊花葉枯線蟲的快速鑒定和早期診斷提供了一個(gè)新的檢測(cè)方法，其具有準(zhǔn)確、靈敏、穩(wěn)定、反應(yīng)結(jié)果肉眼可見(jiàn)和實(shí)用性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。為口岸檢疫、