重組人Ⅱ型膠原250-270多肽的基因構(gòu)建和表達(dá)的研究.pdf

1、主要研究內(nèi)容如下:該文為高效表達(dá)rhCⅡ250-270.在基因構(gòu)建時,就采取了一些方法對目的基因進(jìn)行優(yōu)化.采用E.coli偏愛密碼子,通過化學(xué)合成和PCR技術(shù),構(gòu)建rhCⅡ250-270的目的基因,并重組到pUC19質(zhì)粒中,測序結(jié)果證實目的基因序列與設(shè)計的完全相同;利用同裂酶BamHⅠ和BglⅡ相同的粘性末端,將單聚目的基因片段在重組質(zhì)粒上依次串聯(lián)成多聚目的基因,測序結(jié)果證實多聚目的基因序列與預(yù)期的相符. 在表達(dá)研究中,通過比較rbCⅡ

2、250-270在不同類型的表達(dá)載體上及不同E.coli宿主菌中的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)以非融合方式表達(dá)時,無論是化學(xué)誘導(dǎo)(PKKH)或溫控誘導(dǎo)(pBV220),在不同宿主菌中表達(dá)量都很低,且表達(dá)產(chǎn)物的可溶性很差;以融合方式表達(dá)(pGEX-4T-1和pGEX-4T-3)時,表達(dá)量明顯提高,表達(dá)產(chǎn)物的可溶性較好,但在不同宿主菌中的差異很大.選擇融合表達(dá)的BL21工程菌進(jìn)行表達(dá)條件的優(yōu)化研究,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)溫度對表達(dá)量的影響最大,在優(yōu)化的條件進(jìn)行表達(dá)下,SD