波動性葡萄糖加重人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激.pdf

1、目的：觀察不同濃度葡萄糖及波動性葡萄糖對體外培養(yǎng)后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響及白藜蘆醇(RES)對波動性葡萄糖致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的干預(yù)作用。 方法：將體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞隨機(jī)分為六組：正常葡萄糖組(NG，葡萄糖濃度為5.6mmol/L)、低糖組(LG，葡萄糖濃度為2.8mmol/L)、高糖組(HG，葡萄糖濃度為30mmol/L)、HG與NG波動組(HNF，葡萄糖濃度為30mmol/L和5.6mm

2、ol/L，每24h交替培養(yǎng))、HG與LG波動組(HLF，葡萄糖濃度為30mmol/L和2.8mmol/L，每24h交替培養(yǎng))、HLF+白藜蘆醇組(HLF+RES，RES濃度為10-4mol/L)。各組細(xì)胞每24h換DMEM培養(yǎng)液一次，HNF、HLF、HLF+RES組在前24h用30mmol/L葡萄糖濃度的DMEM培養(yǎng)，后24h用2.8mmol/L或5.6mmol/L葡萄糖濃度的DMEM培養(yǎng)。NG、LG、HG組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞采用RT-P

3、CR分別檢測細(xì)胞內(nèi)的12、24、48h葡萄糖調(diào)解蛋白78(GRP78)、生長阻滯與DNA損傷可誘導(dǎo)基因153(CHOP/GADD153)mRNA的表達(dá)。采用RT-PCR和Western blot方法測定48h各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中GRP78、CHOP/GADD153 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞于48h采用MTT法測定對細(xì)胞增殖率的影響；Hoechst染色觀察各組細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；測定細(xì)胞漿中超氧化物歧化酶(SO

4、D)的活力、總抗氧化能力(TAC)、丙二醛(MDA)的含量。 結(jié)果 1在12h HG、LG組GRP78 mRNA表達(dá)比NG組增加，隨時(shí)間延長在24h、48h逐漸降低，而HG、LG組CHOP/GADD153 mRNA表達(dá)隨時(shí)間延長較NG組增加。48h與NG組相比HG、LG、HNF組GRP78 mRNA的表達(dá)均降低(P<0.01)。而HLF組減低為著，明顯低于HG、LG和HNF組(P<0.01)。與NG組相比，HG、LG、HNF組G

5、RP78蛋白表達(dá)及CHOP/GADD153mRNA和蛋白表達(dá)在48h均增加(P<0.01)。而HLF組升高最著，明顯高于HG、LG和HNF組(P＜0.01)。HLF+RES組較HLF組明顯升高GRP78mRNA表達(dá)(P<0.01)，并降低GRP78蛋白表達(dá)，及CHOP/GADD153mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.01)，但未恢復(fù)至NG組水平。2與NG組相比HG和LG組抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖率(P<0.01)，HLF組對細(xì)胞增殖率抑制最明

6、顯(P<0.01)。Hoechst染色提示HNF和HLF組細(xì)胞凋亡較NG組明顯。3與NG組比較，HG、LG、HNF和HLF組均使SOD活性明顯降低、TAC含量減少及MDA的含量明顯升高，HLF組改變?yōu)橹?P<0.01)。HLF+RES組與HLF組比較，SOD活性升高、TAC含量增加及MDA的含量降低，但是與NG組相比仍未達(dá)到正常水平。結(jié)論高糖和低糖均引起人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化和抗氧化系統(tǒng)失衡，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，波動性葡萄糖加重人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)