RCS大鼠病變發(fā)展過程中視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、目的皇家外科學(xué)院大鼠(Royalcollegeofsurgeonrat，RCS)為遺傳性視網(wǎng)膜色素變性的經(jīng)典動(dòng)物模型。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinalganglioncells，RGCs)是視網(wǎng)膜內(nèi)唯一向高級(jí)視覺中樞投射信號(hào)的神經(jīng)元。研究RGCs在RCS大鼠病變發(fā)展過程中的變化，對(duì)進(jìn)一步認(rèn)識(shí)視網(wǎng)膜色素變性疾病的發(fā)病機(jī)理和病變過程有積極的作用。國(guó)內(nèi)外沒有分類研究RCS大鼠病變發(fā)展過程中RGCs形態(tài)學(xué)改變的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對(duì)出生后RCS大鼠

2、病變發(fā)展過程中不同周齡的RGCs進(jìn)行分類計(jì)數(shù)比較并對(duì)RGCs細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變進(jìn)行了比較研究，初步探討病變發(fā)展過程中其RGCs在形態(tài)學(xué)上的變化特性，加深對(duì)視網(wǎng)膜變性疾病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)。 方法取出生后3、4、5、6、7、8、9、10、11、12周齡RCS大鼠和對(duì)照組大鼠，每周齡各3只，剝離視網(wǎng)膜，固定后行視網(wǎng)膜平鋪片，甲酚紫染色，使用LEICADMTRET顯微鏡及自帶的LEICAQWIN系統(tǒng)軟件進(jìn)行對(duì)比分析。按照節(jié)細(xì)胞層全部細(xì)胞，

3、節(jié)細(xì)胞層中細(xì)胞橫徑，細(xì)胞橫徑≥9μm三種標(biāo)準(zhǔn)，分別觀察和計(jì)數(shù)RCS大鼠和對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞密度上的變化。通過透射電鏡觀測(cè)分析生后3、5、7、9、11周齡RCS大鼠和對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變，并對(duì)RCS大鼠和對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中腫脹線粒體進(jìn)行了計(jì)數(shù)和比較。 結(jié)果1、視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層全部細(xì)胞的密度上，RCS大鼠和對(duì)照組在各年齡段之間沒有顯著差異。Rcs大鼠自身前后年齡段對(duì)照發(fā)現(xiàn)，其生后5、6周齡段密度

4、上相較于生后3周齡段有顯著性下降。其余各周齡段間沒有顯著性差異。 2、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的密度比較上，RCS大鼠生后10周齡的節(jié)細(xì)胞密度比對(duì)照組生后10周齡有顯著增加，其余各周齡間比較兩者沒有顯著差異。RCS大鼠自身前后比較，其生后10周齡神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度顯著高于其生后3、5、6、11周齡，其余個(gè)周齡之間比較沒有顯著差異。 3、α亞型及部分亞型的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度的比較，RCS大鼠從生后4周齡起后的各周齡都顯著少于對(duì)照組，

5、并在7周齡后此差異更為明顯。RCS大鼠自身前后對(duì)照，從生后7周齡開始α亞型及部分β和γ亞型的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度顯著低于正常的細(xì)胞密度。 4、透射電鏡對(duì)RCS大鼠和對(duì)照組大鼠節(jié)細(xì)胞的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的分析。RCS大鼠在病變發(fā)展過程中RGCs細(xì)胞中的核仁和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系統(tǒng)依然能夠保持正常的形態(tài)，與對(duì)照組大鼠相比較兩者間未見差異。在病變的發(fā)展過程中RCS大鼠的RGCs細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)中線粒體腫脹程度呈現(xiàn)明顯的增加趨勢(shì)。RCS大鼠線粒體腫脹程度從生

6、后5、7、9、11周齡均顯著高于對(duì)照組。RCS大鼠自身前后對(duì)照可以發(fā)現(xiàn)，從生后5周齡開始后的各周齡其線粒體腫脹程度即顯著高于生后3周齡。 結(jié)論采用視網(wǎng)膜平鋪片及甲酚紫染色，通過LEICADMTRET倒置顯微鏡和電腦計(jì)數(shù)軟件對(duì)視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層神經(jīng)元進(jìn)行分析，以及在透射電鏡下觀察節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，我們得到以下結(jié)論： 1.RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性的病變發(fā)展過程中，視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層神經(jīng)元在膠質(zhì)細(xì)胞增生和異位細(xì)胞遷入的情況下，能夠保持整

7、體密度上的穩(wěn)定。 2.RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性的病變發(fā)展過程中，視網(wǎng)膜中α亞型的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及部分β和γ亞型的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞從睜眼后不久即開始出現(xiàn)細(xì)胞密度和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)上的改變，并在生后7周齡時(shí)這個(gè)變化加劇，出現(xiàn)了大量節(jié)細(xì)胞的缺失。 3.透射電鏡觀察節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)RCS大鼠的核仁和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系統(tǒng)在病變發(fā)展過程中其形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)沒有出現(xiàn)變化，但是其線粒體腫脹程度隨著視網(wǎng)膜色素變性疾病的發(fā)展不斷增加，并與視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞密度出現(xiàn)下降的時(shí)間