絲裂霉素(MMC)及短期高脂飼養(yǎng)對(duì)大鼠胰島細(xì)胞損傷及機(jī)制研究.pdf

1、目的：近年來(lái)，隨著大量腫瘤晚期患者化療后生存率的延長(zhǎng)，由抗腫瘤藥物引發(fā)的毒副作用的預(yù)防和治療也同時(shí)引起了人們更多地關(guān)注和研究。有研究表明，在化療過(guò)程中或化療后新發(fā)糖尿病病例越來(lái)越多見(jiàn)，于是一些專家提出化療藥物可能會(huì)直接損害胰島細(xì)胞功能，并最終導(dǎo)致糖耐量異?；蛱悄虿〉陌l(fā)生。但目前這方面的研究多數(shù)局限于臨床回顧性分析研究，未作進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。同時(shí)，當(dāng)前腫瘤患者在化療間隙期間常會(huì)給予高脂高營(yíng)養(yǎng)飲食，而高脂飲食會(huì)導(dǎo)致胰島素抵抗和分泌缺陷，進(jìn)一

2、步損害胰島細(xì)胞。因此，進(jìn)行化療藥物及高脂飲食對(duì)動(dòng)物胰島細(xì)胞損害的實(shí)驗(yàn)性研究及初步探討其機(jī)制將具有非常重要的意義。絲裂霉素（Mitomycin，MMC）屬于抗生素類抗腫瘤藥物的一種，其化學(xué)結(jié)構(gòu)中有乙撐亞胺及氨甲酰酯基團(tuán)，具有烷化作用，能與DNA雙鏈交叉聯(lián)結(jié)，抑制DNA復(fù)制，也能使部分DNA斷裂，屬于周期非特異性藥物，抗腫瘤譜廣，t1/2為1小時(shí)，主要不良反應(yīng)是明顯而持久的骨髓抑制及胃腸道反應(yīng)，偶見(jiàn)心、肝、腎毒性和間質(zhì)性肺炎等。本研究分別對(duì)

3、短期高脂喂養(yǎng)和普通飼料喂養(yǎng)的Wistar大鼠靜脈給予MMC，來(lái)探討化療藥物（MMC）及短期高脂飲食對(duì)大鼠胰島功能及組織結(jié)構(gòu)的影響，從而為腫瘤患者化療期間的血糖監(jiān)測(cè)和飲食提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。
　　 方法：
　　 健康清潔級(jí)Wistar大鼠（48只），雄性，6周齡，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組（NC組）、絲裂霉素組（MMC組）、單純高脂飼料喂養(yǎng)組（HF組）、高脂飼料+絲裂霉素組（HF+MMC組），每組12只。分組

4、后第6天開(kāi)始給藥，MMC組和HF+MMC組尾靜脈內(nèi)注射1.67mg/kg體重濃度為1g/L的絲裂霉素，NC組和HF組給予相應(yīng)劑量的生理鹽水。各組大鼠禁食10小時(shí)，在給藥48小時(shí)后行腹腔內(nèi)葡萄糖耐量試驗(yàn)（IPGTT），采集尾靜脈血測(cè)血糖和胰島素。給藥3日后放血處死，鈍性分離胰腺，濾紙吸干水份后稱重。取胰尾部分以10％福爾馬林固定后進(jìn)行組織學(xué)檢查。
　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng)：在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心喂養(yǎng)，自由攝水，定時(shí)定量給飼，單籠單只喂養(yǎng)。按

5、60Kcal熱量/只/天，于每日16：00喂養(yǎng)飼料，次日10：00收取剩余飼料。普通飼料成分：碳水化合物熱卡占60％，脂肪熱卡占11％，蛋白質(zhì)熱卡占29％。高脂飼料配比：碳水化合物熱卡占25％，脂肪熱卡占65％、蛋白熱卡占10％。
　　 2、腹腔內(nèi)葡萄糖耐量試驗(yàn)（IPGTT）
　　 大鼠自實(shí)驗(yàn)當(dāng)日06：00起禁食，16：00腹腔內(nèi)給予20％葡萄糖溶液，劑量按2.0g葡萄糖/kg體重計(jì)算而來(lái)。于注射前（0分），注射后20分

6、鐘，60分鐘，120分鐘分別自尾靜脈采血0.2-0.3ml，4℃，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，分離血漿，一部分立即測(cè)定血糖，剩余部分于-20℃冰箱保存，用于胰島素的測(cè)定。
　　 3、血糖、胰島素的測(cè)定
　　 血糖采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定，胰島素采用放射免疫法測(cè)定。
　　 4、游離脂肪酸（FFA）測(cè)定
　　 血漿游離脂肪酸（FFA）采用Cu2+比色法測(cè)定。
　　 5、大鼠胰島細(xì)胞的組織學(xué)檢查

7、>　　 用10％福爾馬林固定24小時(shí)后，梯度酒精脫水，標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)技術(shù)石蠟包埋。石蠟切片機(jī)間隔4μm。連續(xù)切片，用免疫組化標(biāo)記胰島β細(xì)胞后測(cè)量胰島β細(xì)胞團(tuán)的平均面積，用免疫組化檢測(cè)insulin及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)。
　　 6、數(shù)據(jù)處理
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組間資料比較用單因素方差分析（ANOVA）檢驗(yàn)，若差異有顯著性，任意兩組間比較當(dāng)滿足

8、方差齊性時(shí)用LSD法，不滿足方差齊性要求時(shí)用Tamhane’s T2法進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)的顯著性用P值表示，P<0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果：
　　 1、對(duì)體重的影響
　　 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，大鼠隨機(jī)分組，各組體重比較無(wú)差別，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。打藥時(shí)、腹腔內(nèi)葡萄糖耐量試驗(yàn)時(shí)及處死大鼠取材時(shí)，各組大鼠體重比較差別不顯著，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、各組大鼠IPGTT前后血糖結(jié)

9、果
　　 各組大鼠空腹血糖比較，HF組和HF+MMC組均高于正常對(duì)照組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMC組與正常對(duì)照組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF組、HF+MMC組與MMC組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF組與HF+MMC組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 MMC組、HF組及HF+MMC組血糖在糖負(fù)荷后20分鐘、60分鐘及120分鐘均高于正常對(duì)照組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而HF+MMC組血

10、糖高于HF組及MMC組血糖，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMC組與HF組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、葡萄糖刺激后的大鼠胰島素水平測(cè)定結(jié)果
　　 各組大鼠空腹胰島素比較，HF+MMC組低于正常對(duì)照組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMC組及HF組與正常對(duì)照組比較，P>0.05，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HF+MMC組低于MMC組及HF組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMC組與HF組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。<

11、br>　　 糖負(fù)荷后20分鐘胰島素比較，MMC組、HF組、HF+MMC組胰島素均低于對(duì)照組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HF+MMC組低于MMC組及HF組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMC組與HF組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 糖負(fù)荷后60分鐘胰島素比較，MMC組、HF+MMC組胰島素均低于對(duì)照組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF組胰島素與對(duì)照組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HF組胰島素高于MMC組，但低于H

12、F+MMC組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMC組胰島素與HF組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 糖負(fù)荷后120分鐘胰島素比較，HF+MMC組胰島素低于對(duì)照組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMC組及HF組胰島素與對(duì)照組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MMC組與HF組、HF+MMC組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF+MMC組胰島素低于HF組，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 各組大鼠血漿胰島素均于腹腔注射

13、葡萄糖后20分鐘達(dá)峰值，正常對(duì)照組血漿胰島素峰值約為基礎(chǔ)值的3.80倍，MMC組大鼠血漿胰島素峰值約為基礎(chǔ)值的2.60倍，HF組血漿胰島素峰值約為基礎(chǔ)值的2.77倍，HF+MMC組血漿胰島素峰值約為基礎(chǔ)值的2.22倍。
　　 4、各組大鼠血漿游離脂肪酸（FFA）比較
　　 處死前各組大鼠血漿游離脂肪酸FFA水平比較，MMC組與對(duì)照組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF組和HF+MMC組均高于對(duì)照組及MMC組，P<0.0

14、5，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF組與HF+MMC組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、各組大鼠胰腺重量比較
　　 對(duì)照組、MMC組、HF組及HF+MMC組大鼠胰腺重量及胰腺/體重比值（％）均依次減少，P<0.05，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6、胰島β細(xì)胞團(tuán)平均面積比較
　　 對(duì)照組、MMC組、HF組及HF+MMC組大鼠胰島β細(xì)胞團(tuán)平均面積比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 7、胰腺細(xì)胞ins

15、ulin及bcl-2表達(dá)水平的改變
　　 對(duì)照組、MMC組、HF組及HF+MMC組大鼠β細(xì)胞insulin表達(dá)水平比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 各組大鼠β細(xì)胞bcl-2表達(dá)水平比較，MMC組與HF+MMC組均低于對(duì)照組，P<0.05，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF組與對(duì)照組比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF組高于MMC組，P<0.05，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF+MMC組低于MMC組和HF組，P<0.05，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義