平行設(shè)計(jì)雙氫青蒿素哌喹片人體藥動(dòng)學(xué)及生物等效性評(píng)價(jià)的研究.pdf

1、目的:1.建立高效液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行人血漿中雙氫青蒿素和哌喹濃度測定。2.平行設(shè)計(jì)雙氫青蒿素哌喹片在健康志愿者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究，并評(píng)價(jià)它們的吸收、分布、代謝及排泄動(dòng)力學(xué)特征。3.采用不同統(tǒng)計(jì)分析方法進(jìn)行雙氫青蒿素哌喹片等效性評(píng)價(jià)，研究末端消除相及不同藥代動(dòng)力學(xué)軟件對其等效性評(píng)價(jià)的影響。
　　 方法:1.血樣經(jīng)處理后采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測定。雙氫青蒿素的質(zhì)譜條件為:電噴霧電離源(ESI)，正離子模式檢測;

2、毛細(xì)管電壓4000 V;干燥氣溫度350℃，干燥氣(N2)流速12.0 L·min-1，霧化氣壓力45 psi;選擇性監(jiān)測質(zhì)荷比（m/z）為221.2（雙氫青蒿素）和283.2（內(nèi)標(biāo)青蒿素）的離子峰，碎片電壓分別為80 V和70 V。其色譜條件為:選用色譜柱InertsilODS-3(4.6×150mm，5μm)，流動(dòng)相為10 mmol·L-1乙酸銨（含0.1％甲酸）∶甲醇∶乙腈=37∶43∶20(V/V/V)，在線脫氣;柱溫:30℃，

3、流速:0.8 mL·min-1，進(jìn)樣量:10μL。
　　 哌喹的質(zhì)譜條件為:電噴霧電離源(ESI)，正離子模式檢測;毛細(xì)管電壓4000 V，干燥氣溫度為350℃，干燥氣(N2)流速11.0 L·min-1，霧化氣壓力50 psi;選擇性監(jiān)測質(zhì)荷比(m/z)為535.2（哌喹）和235.1（內(nèi)標(biāo)利多卡因）的離子峰，碎片電壓分別為120 V和90 V。其色譜條件為:Gemini C18色譜柱(4.6×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙

4、腈∶2.5 mM乙酸銨（氨水調(diào)pH值至10.5）=63∶37，在線脫氣;柱溫:25℃，流速:0.8 mL·min-1，進(jìn)樣量:5μL。
　　 2.采用單中心、隨機(jī)、平行、對照試驗(yàn)設(shè)計(jì)。72例健康男性受試者按體重配對后隨機(jī)分為兩組，分別服用雙氫青蒿素哌喹片試驗(yàn)制劑或參比制劑，于藥前和藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、10、12、24、36h和3、5、7、10、14、21、28天，肘靜脈取血6 mL

5、，肝素抗凝，6000rpm，離心5 min，分離血漿，-20℃冷凍保存待測。采用本課題建立的高效液相色譜-質(zhì)譜法測定雙氫青蒿素和哌喹的經(jīng)時(shí)血濃度。
　　 根據(jù)所測雙氫青蒿素、哌喹血濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，采用WinNonLin6.2.1藥代動(dòng)力學(xué)軟件分別計(jì)算雙氫青蒿素、哌喹主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(t1/2，AUC0-t，AUC0-∞，CL，Vd)， Cmax和Tmax采用實(shí)測值，并根據(jù)試驗(yàn)制劑和參比制劑雙氫青蒿素哌喹AUC0-t計(jì)算試驗(yàn)制劑

6、的相對利用度。對雙氫青蒿素和哌喹主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC0-t和Cmax進(jìn)行90％置信區(qū)間分析，評(píng)價(jià)試驗(yàn)制劑和參比制劑的生物等效性。
　　 3.根據(jù)0-72h所測哌喹的血濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，用WinNonLin6.2.1藥代動(dòng)力學(xué)軟件計(jì)算哌喹藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC0-72，Cmax和Tmax采用實(shí)測值，對哌喹藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC0-72和Cmax進(jìn)行90％置信區(qū)間分析，評(píng)價(jià)試驗(yàn)制劑和參比制劑的生物等效性，并比較其與AUC0-672等效性評(píng)價(jià)結(jié)

7、果的不同。
　　 采用PKsolver3.0和WinNonLin6.2.1兩種藥代動(dòng)力學(xué)軟件對雙氫青蒿素哌喹片進(jìn)行人體藥動(dòng)學(xué)和生物等效性研究，用配對t檢驗(yàn)對兩種軟件計(jì)算出的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(t1/2，AUC0-t，AUC0-∞，CL，Vd)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，考察是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并比較二者生物等效性評(píng)價(jià)結(jié)果的不同。
　　 結(jié)果:1.本課題建立的HPLC-MS樣本測定條件下，雙氫青蒿素和哌喹的基質(zhì)效應(yīng)、回收率分別在96％～105

8、％、48％～62.5％和91％～109.3％、91％～108％，血漿中的基質(zhì)對測定無干擾，滿足測定要求。雙氫青蒿素在5～500 ng·mL-1血漿濃度范圍內(nèi)線性良好，r2＞0.99;哌喹在5～400 ng·mL-1血漿濃度范圍內(nèi)線性良好，r2＞0.99。二者定量下限均為5 ng·mL-1，準(zhǔn)確度分別為93％～107％、100％～110％，均在±20％之內(nèi)，且精密度小于5％。雙氫青蒿素和哌喹血漿樣本穩(wěn)定性試驗(yàn)的準(zhǔn)確度分別在86％～113％

9、和88％～113％之間，精密度均小于11％，表明二者穩(wěn)定性良好。
　　 2.72名受試者單次口服試驗(yàn)制劑或參比制劑雙氫青蒿素哌喹片后采用WinNonLin6.2.1藥代動(dòng)力學(xué)軟件分析得出的雙氫青蒿素主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2分別為(1.03±0.17)h和(1.11±0.28)h，Tmax分別為(1.72±0.96)h和(1.53±0.92)h，Cmax分別為(236.243±91.087) ng·mL-1和(245.184±120

10、.789) ng·mL-1，AUC0-t分別為(561.613±189.513) ng·mL-1·h和(552.821±240.838) ng·mL-1·h，AUC0-∞分別為(574.784±190.812) ng·mL-1·h和(565.195±241.822) ng·mL-1·h，CL分別為(236.0±88.9) L·h-1和(252.4±118.2) L·h-1, Vd分別為(347.4±141.5)L和(393.3±162.

11、4)L。以雙氫青蒿素AUC0-t計(jì)算相對生物利用度F為101.6％。哌喹主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)t1/2分別為(289.08±171.11)h和(269.07±238.16)h，Tmax分別為(3.32±1.89)h和(3.13±0.91) h, Cmax分別為(223.815±110.931) ng·mL-1和(225.494±105.222)ng·mL-1, AUC0-t分別為(8969.881±4632.410) ng·mL-1·h和(

12、8817.516±4232.909)ng·mL-1·h, AUC0-∞分別為(11906.837±5792.982) ng·mL-1·h和(11461.232±5755.807)ng·mL-1·h, CL分別為(103.5±58.1) L·h-1和(109.6±63.4) L·h-1, Vd分別為(35076.5±15303.4)L和(32034.7±18566.3)L。以哌喹AUC0-t計(jì)算相對生物利用度F為101.7％。
　　

13、 雙氫青蒿素AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為89.1％～121.8％、83.6％～119.3％;哌喹AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為82.9％～123.8％、80.7％～120.9％;均分別落在80％～125％、75％～133％區(qū)間內(nèi)。
　　 3.以哌喹AUC0-72計(jì)算相對生物利用度F為98.0％。哌喹AUC0-72比值的90％置信區(qū)間為83.5％～117.5％，同樣落在80％～125％區(qū)

14、間內(nèi)。
　　 72名受試者單次口服試驗(yàn)制劑或參比制劑雙氫青蒿素哌喹片后采用PKsolver3.0藥代動(dòng)力學(xué)程序分析得出的雙氫青蒿素主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2分別為(1.02±0.17)h和(1.11±0.27)h，Tmax分別為(1.72±0.96)h和(1.53±0.92)h，Cmax分別為(236.243±91.087) ng·mL-1和(245.184±120.789) ng·mL-1, AUC0-t分別為(575.108±1

15、94.250) ng·mL-1·h和(565.444±246.383) ng·mL-1·h, AUC0-∞分別為(588.198±195.521) ng·mL-1·h和(577.819±247.258) ng·mL-1·h，CL分別為(230.7±87.2) L·h-1和(246.9±115.5) L·h-1, Vd分別為(338.7±140.6)L和(382.4±156.8)L。以雙氫青蒿素AUC0-t計(jì)算相對生物利用度F為101.7

16、％。哌喹主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)t1/2分別為(288.87±171.31)h和(269.07±238.16)h，Tmax分別為(3.32±1.89)h和(3.13±0.91) h, Cmax分別為(223.815±110.931) ng·mL-1和(225.494±105.222)ng·mL-1, AUC0-t分別為(9102.841±4723.946) ng·mL-1·h和(8958.835±4306.120)ng·mL-1·h, AUC

17、0-∞分別為(12035.729±5875.097) ng·mL-1·h和(11602.551±5814.924)ng·mL-1·h, CL分別為(102.4±57.2) L·h-1和(108.3±62.9) L·h-1,Vd分別為(34712.0±15249.5)L和(31715.6±18516.7)L。以哌喹AUC0-t計(jì)算相對生物利用度F為101.6％。雙氫青蒿素AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為89.2％～121

18、.9％、83.6％～119.3％;哌喹AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為82.8％～123.7％、80.7％～120.9％;均分別落在80％～125％、75％～133％區(qū)間內(nèi)。
　　 結(jié)論:
　　 1.本文建立的高效液相色譜-質(zhì)譜法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，適用于人血漿中雙氫青蒿素和哌喹濃度測定。
　　 2.72名受試者口服雙氫青蒿素哌喹片試驗(yàn)制劑或參比制劑后在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征和血藥濃度均存在很明顯的個(gè)體

19、差異，其中哌喹具有高表觀分布容積和低清除率，故半衰期很長，其血藥濃度-時(shí)間曲線出現(xiàn)多峰現(xiàn)象，證實(shí)其在體內(nèi)存在肝腸循環(huán)。
　　 體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特征顯示，雙氫青蒿素和磷酸哌喹的復(fù)方制劑不僅在抗瘧機(jī)制上有協(xié)同作用，在藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)上也存在互補(bǔ)效應(yīng)。
　　 雙氫青蒿素、哌喹主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC0-t、Cmax經(jīng)90％置信區(qū)間分析，顯示兩制劑間無差異，符合生物等效的假設(shè)。即雙氫青蒿素哌喹片試驗(yàn)制劑與市售雙氫青蒿素哌喹片參比制劑具有

20、生物等效性，為生物等效制劑。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程順利，受試者服用雙氫青蒿素哌喹片試驗(yàn)制劑或參比制劑后，3名受試者發(fā)生輕微不良事件，以上不良事件在短時(shí)間內(nèi)消失，均未服用相關(guān)治療藥物。1名受試者試驗(yàn)后肝功能輕微異常，7日內(nèi)恢復(fù)正常，未服用治療藥物，其他受試者試驗(yàn)前后未見實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果發(fā)生有臨床意義的改變。
　　 3.對于長半衰期藥物哌喹來說，采用AUC0-72和AUC0-672分別評(píng)價(jià)其生物等效性結(jié)果相近，即采取0-72 h的血藥濃度-時(shí)間