應(yīng)用多種方法檢測(cè)人乳頭狀瘤病毒與乳腺癌關(guān)系的研究.pdf

1、乳腺癌是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，每年全世界約有130萬(wàn)人被診斷為乳腺癌，而有約40萬(wàn)人死于該病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的統(tǒng)計(jì)資料（GLOBOCAN2000:CancerIncidence,MortalityandPrevalenceWorldwide,Version1.0）,2000年全球女性乳腺癌的新發(fā)病例超過(guò)100萬(wàn)，標(biāo)化發(fā)病率為35.66/10萬(wàn)，標(biāo)化死亡率為12.51/10萬(wàn)。從世界范圍來(lái)看，乳腺癌已成為全球婦女首發(fā)的惡性腫瘤。

2、近20年來(lái)，我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)，尤其在京、津、滬等大城市，乳腺癌已位居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首，嚴(yán)重危害廣大婦女的健康[1]。乳腺癌的病因有很多，包括不育、生育次數(shù)少、第一胎足月產(chǎn)年齡晚、初潮年齡早、良性乳腺疾病史、乳腺癌家族史、放射線暴露等因素已經(jīng)被確認(rèn)與乳腺癌有關(guān)。但是乳腺癌發(fā)生的分子機(jī)制尚不完全清楚。因此研究其發(fā)病原因?qū)τ谌祟惞タ巳橄侔┻@一難關(guān)有著重要意義。
　　高危型人乳頭狀瘤病毒（HPV）經(jīng)證明是宮頸癌的主

3、要成因，比如HPV16、18、31、33和39。同時(shí)，HPV也被認(rèn)為是其他部位發(fā)生鱗狀細(xì)胞癌的原因，比如肛門、外陰和食管[2,3]。1990年，Band等人曾報(bào)告HPVDNA可以使人乳腺上皮細(xì)胞永生化，減少它們對(duì)生長(zhǎng)因子的需要[4]。自1992年后，越來(lái)越多的研究通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）在乳腺癌組織中檢測(cè)到高危險(xiǎn)的HPV[5-15]。另一方面，尚無(wú)證據(jù)表明HPV會(huì)感染人體內(nèi)的乳腺組織，迄今為止也沒(méi)有報(bào)告過(guò)HIV/AIDS病人的乳腺內(nèi)發(fā)

4、生HPV感染[16]。
　　此外，眾多的研究已經(jīng)在乳腺癌組織內(nèi)檢測(cè)到HPVDNA。這就產(chǎn)生了一個(gè)疑問(wèn)，即HPV是否在乳腺癌中起到了一定的致癌作用。另一方面，人乳頭狀瘤病毒似乎無(wú)法在體外感染正常的乳腺細(xì)胞，而對(duì)于AIDS病人而言，也沒(méi)有觀測(cè)到人類乳腺感染HPV。當(dāng)前尚無(wú)法解釋這些具有沖突的觀測(cè)結(jié)果。在乳腺癌的各個(gè)致癌階段，有關(guān)HPV感染具有的潛在作用應(yīng)當(dāng)通過(guò)進(jìn)一步的試驗(yàn)加以確認(rèn)。
　　由此，我課題小組結(jié)合我科臨床取材方面的優(yōu)勢(shì)

5、，收集第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院血管內(nèi)分泌外科2009.3～2010.3乳腺癌組織標(biāo)本80例，以及乳腺良性病變組織標(biāo)本80例。80例乳腺癌患者的年齡為35-75歲的女性，中位年齡55.4歲。其中包括44例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，20例浸潤(rùn)性小葉癌，9例小葉原位癌，3例單純癌，2例硬癌，1例髓樣癌，1例腺癌。80例乳腺良性病變患者的年齡為25～67歲的女性，中位年齡43.6歲。其中包括乳房纖維腺瘤57例，乳管內(nèi)乳頭狀瘤23例。我們參考了國(guó)內(nèi)外眾多文獻(xiàn)，采

6、用了國(guó)際上運(yùn)用比較廣泛的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（FQ-PCR）的方法，并且同時(shí)運(yùn)用了透射電鏡的方法作為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。具體情況如下：
　　1.根據(jù)查閱的國(guó)內(nèi)外眾多文獻(xiàn)，最終選取了目前檢出率比較高的HPV16，以及HPV18亞型作為目標(biāo)亞型，收集第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院血管內(nèi)分泌外科2009.3～2010.3乳腺癌組織標(biāo)本80例，以及乳腺良性病變組織標(biāo)本80例。80例乳腺癌患者的年齡為35-75歲的女性，中位年齡55.4歲。其中包括44例浸潤(rùn)性導(dǎo)

7、管癌，20例浸潤(rùn)性小葉癌，9例小葉原位癌，3例單純癌，2例硬癌，1例髓樣癌，1例腺癌。80例乳腺良性病變患者的年齡為25～67歲的女性，中位年齡43.6歲。其中包括乳房纖維腺瘤57例，乳管內(nèi)乳頭狀瘤23例。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（FQ-PCR）作為檢測(cè)方法，同時(shí)選擇HPV16以及HPV18全長(zhǎng)質(zhì)粒作為陽(yáng)性對(duì)照，蒸餾水作為陰性對(duì)照。
　　2.仍然是上述所收集的乳腺組織，取腫瘤組織，按照所要求的標(biāo)準(zhǔn)制成標(biāo)本，送我校直基礎(chǔ)部電鏡中心觀察