雷帕霉素通過調(diào)節(jié)自噬—溶酶體系統(tǒng)功能改善apoE-5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙.pdf

1、目的：β淀粉樣蛋白（β‐amyloid，Aβ）代謝異常是阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。自噬在AD發(fā)病機(jī)制中可能起雙重作用,既可加速疾病的進(jìn)展，但在某些條件下又起保護(hù)作用,可能通過調(diào)節(jié)Aβ產(chǎn)生和降解的動(dòng)態(tài)平衡而影響疾病的進(jìn)展。ApoE4是AD重要的危險(xiǎn)因素， ApoE可能通過其特定的亞型調(diào)節(jié)Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用，但是關(guān)于自噬和ApoE4參與AD發(fā)病的具體機(jī)制仍不明確。本研究以表達(dá)人Apo

2、E4、ApoE3、ApoE2和ApoE基因敲除的APP/PS1 AD轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為模型（apoE-5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠），應(yīng)用Rapamycin誘導(dǎo)激活自噬-溶酶體系統(tǒng)，觀察ApoE不同遺傳背景和年齡下腦內(nèi)自噬-溶酶體系統(tǒng)功能、神經(jīng)病理學(xué)和行為學(xué)差異。
　　方法：SPF級(jí)1.5月齡、3月齡、6月齡雄性apoE-5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為溶媒對(duì)照組、雷帕霉素處理組（1mg/Kg），每組8～11只，灌胃給藥，每日1次，共30天。采用M

3、orris水迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。電鏡觀察海馬CA1區(qū)自噬-溶酶體的超微結(jié)構(gòu)及數(shù)量。免疫組化和ELISA檢測(cè)腦內(nèi)Aβ水平。免疫熒光觀察腦內(nèi)自噬體、溶酶體以及溶酶體酶的數(shù)量。Western blotting檢測(cè)海馬自噬體標(biāo)記物L(fēng)C-3、溶酶體酶Cathepsin D、自噬信號(hào)通路中pmTOR/mTOR和beclin-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：雷帕霉素可不同程度改善apoE/5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠視空間學(xué)習(xí)記憶能力，以6月齡apoE3/

4、5XFAD、apoE4/5XFAD組改善最為明顯。雷帕霉素可減少不同月齡、不同亞型apoE/5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠海馬自噬小體內(nèi)電子致密物的沉積。雷帕霉素可抑制pmTOR的表達(dá)，增加自噬體標(biāo)記物L(fēng)C-3和組織蛋白酶D（CathepsinD）的表達(dá)，調(diào)節(jié)自噬溶酶體系統(tǒng)的功能。雷帕霉素可減少apoE/5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠海馬內(nèi)不溶性Aβ的數(shù)量，尤以6月齡apoE4/5XFAD組減少最為明顯。
　　結(jié)論：隨著年齡的增加不同亞型的apoE/