雙光子激發(fā)熒光顯微成像技術(shù)在膽囊癌診斷中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　膽囊癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，H-E）染色的病理組織學(xué)。然而該項傳統(tǒng)技術(shù)過程具有相對比較費時、染色劑環(huán)境污染和著色問題等不足。新式的雙光子激發(fā)熒光（two-photon excited fluorescence，TPEF）顯微成像技術(shù)，基于細(xì)胞自身的熒光信號，對未染色組織切片成像能直接產(chǎn)生詳細(xì)的組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)學(xué)等特征，從而形成細(xì)胞水平的圖像。本課題，利用TPEF顯微鏡對人類正

2、常膽囊組織和三種分化程度不同膽囊癌的微結(jié)構(gòu)進(jìn)行成像，研究無H-E染色切片上的膽囊癌組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核等形態(tài)學(xué)的改變，并輔以盲法試驗，以探討TPEF顯微成像技術(shù)對膽囊癌診斷的可行性和意義。
　　方法：
　　首先，正常膽囊組織和三種分化程度不同膽囊癌的組織切片經(jīng)脫蠟后行TPEF顯微鏡掃描成像，成像后標(biāo)本經(jīng)H-E染色、普通光學(xué)顯微鏡成像，TPEF圖片與相應(yīng)的H-E圖片進(jìn)行病理組織學(xué)比較；其次，通過對比三種分化程度不同膽

3、囊癌的TPEF圖片與正常膽囊組織的TPEF圖片中組織學(xué)的改變，以及核和核仁面積的改變，建立膽囊癌的光學(xué)診斷特征；最后，28例石蠟切片進(jìn)行盲法試驗，評價TPEF顯微成像技術(shù)對膽囊癌光學(xué)診斷的準(zhǔn)確性。
　　結(jié)果：
　　TPEF顯微鏡能清晰成像分層的正常膽囊組織結(jié)構(gòu)，包括粘膜層、肌層和漿膜層；典型的腫瘤細(xì)胞，以細(xì)胞和細(xì)胞核多形性、核增大和核仁擴(kuò)大等為特征，也能經(jīng)TPFE顯微鏡在無H-E染色的組織切片中識別出。根據(jù)組織形態(tài)學(xué)的差異，

4、TPEF顯微成像不但可以鑒別高、中、低分化膽囊癌的組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)特征，而且可以區(qū)分膽囊癌細(xì)胞和正常細(xì)胞不同的核和核仁面積，TPEF圖片和H-E圖片具有可比性。在28例石蠟切片的盲法試驗中，TPEF光學(xué)診斷的準(zhǔn)確性為96.4％。
　　結(jié)論：
　　研究結(jié)果表明TPEF顯微鏡對石蠟切片進(jìn)行成像，基于組織形態(tài)學(xué)的改變，具有區(qū)分膽囊癌和正常膽囊以及進(jìn)一步區(qū)分三種分化類型膽囊癌的能力。本研究獲得的TPEF成像結(jié)果不亞于H-E染色的病理成