溴芬酸鈉-殼聚糖納米粒的制備及其對兔角膜新生血管的影響.pdf

1、目的：制備一種新型納米級眼藥—溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒，初步研究該藥的體外緩釋性能、眼表毒性及對角膜新生血管影響，探討其作用機(jī)制，為臨床上治療角膜新生血管提供新思路。
　　本實(shí)驗(yàn)分為三部分:
　　實(shí)驗(yàn)一:溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒的制備及其體外釋藥實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)二:溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒的兔眼表毒性實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)三:溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒對兔角膜新生血管的影響
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一:用離子膠聯(lián)法制備溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒(B

2、F/CSnanoparticles)，觀察其表征（粒徑，Zeta電位，包封率和載藥量等）及體外釋藥性能。
　　實(shí)驗(yàn)二:按照實(shí)驗(yàn)一的方法制備溴芬酸鈉/殼聚糖納米?；鞈乙?。5只雌性新西蘭大白兔被用于實(shí)驗(yàn)，每30分鐘滴濃度為0.1％的溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒混懸液到實(shí)驗(yàn)眼（右眼），同時給予對照眼（左眼）相同劑量生理鹽水，持續(xù)6小時。之后在特定的時間點(diǎn)分別對實(shí)驗(yàn)眼和對照眼的眼部癥狀進(jìn)行評分，評分標(biāo)準(zhǔn)采用:1987年經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(Org

3、anization for Economic Cooperation and Development, OECD)制定的眼表刺激性實(shí)驗(yàn)評分系統(tǒng)。評分后處死實(shí)驗(yàn)兔，并取下兔的角膜、結(jié)膜及眼瞼組織分別作組織病理學(xué)檢測，觀察兩組各組織的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)有無差異。
　　實(shí)驗(yàn)三:利用NaOH建立兔角膜堿燒傷模型。60只新西蘭大白兔被隨機(jī)分為生理鹽水對照組（A組）、0.1％溴芬酸鈉水溶液治療組（B組）、0.1％溴芬酸鈉/殼聚糖納米?；鞈乙褐委煟–組

4、），每組20只。術(shù)后7d、14d、21d、28d分別測量各組的角膜新生血管面積，并取角膜組織行HE染色和熒光定量PCR檢測，比較各組角膜組織中COX-2和VEGF的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一:制備的溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒呈球形，表面光滑，大小均一。根據(jù)不同濃度的溴芬酸鈉所制備的納米粒平均粒徑分布在362.0±14.7～548.7±14.4 nm之間，Zeta電位分布在22.9±4.3～43.2±4.7mV之間，載藥量和包

5、封率的范圍分別為11.26-57.71％和22.48-67.11％。體外釋藥實(shí)驗(yàn)中，溴芬酸鈉的釋放初期存在突釋現(xiàn)象，之后的釋放則相對緩慢，且釋藥時間可達(dá)48h。
　　實(shí)驗(yàn)二:根據(jù)評分系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)組評分為1，對照組評分為0。實(shí)驗(yàn)組和對照組的角膜、結(jié)膜及眼瞼組織，均未見任何細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的差異，均未見組織細(xì)胞水腫及任何異常炎性細(xì)胞的浸潤。
　　實(shí)驗(yàn)三:堿燒傷能夠誘導(dǎo)角膜的炎癥反應(yīng)和角膜新生血管的形成。同BF水溶液治療組和對照組比較，B

6、F/CS納米粒能延緩角膜新生血管的出現(xiàn)時間，減少新生血管面積(P＜0.05)，能抑制堿燒傷后不同時間點(diǎn)角膜組織的炎癥反應(yīng)，還能下調(diào)角膜組織中COX-2和VEGF基因mRNA的表達(dá)(P＜0.05)。
　　結(jié)論
　　1.用離子膠聯(lián)法能成功制備溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒，該方法簡便、易于操作、可重復(fù)性強(qiáng);制備的溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒物理化學(xué)性狀穩(wěn)定，在體外具有良好的緩釋作用。
　　2.溴芬酸鈉/殼聚糖納米粒混懸液不引起兔眼表的炎