塞來昔布聯(lián)合卡馬西平對難治性癲癇大鼠毒副作用的評估.pdf

1、 目的：選擇性環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑塞來昔布聯(lián)合抗癲癇藥物(Anti-epileptic drugs , AEDs)卡馬西平治療難治性癲癇(Refractory epilepsy,RE)模型大鼠,研究聯(lián)合應(yīng)用對難治性癲癇大鼠胃竇粘膜、腎臟組織、血液凝血功能、心肌損傷標(biāo)志物肌鈣蛋白T(cTnT)值的影響,探討塞來昔布聯(lián)合卡馬西平治療難治性癲癇大鼠時,對大鼠靶器官的毒副作用,為臨床安全用藥提供動物實驗依據(jù)。方法：1、實驗分組：本

2、實驗共設(shè)立7個實驗組,即假手術(shù)組,海人酸手術(shù)組,難治性癲癇大鼠生理鹽水對照組(生理鹽水組)、難治性癲癇大鼠卡馬西平治療組(卡馬西平治療組)、難治性癲癇大鼠塞來昔布治療組(塞來昔布治療組)、難治性癲癇大鼠卡馬西平聯(lián)合常規(guī)劑量塞來昔布治療組(聯(lián)合治療組)、難治性癲癇大鼠卡馬西平聯(lián)合大劑量塞來昔布治療組(大劑量聯(lián)合治療組)。2、建立難治性癲癇模型：a、癲癇模型的建立：采用海人酸海馬區(qū)快速點燃方法建立癲癇大鼠模型,即將海人酸(Kainic Ac

3、id,KA)1.5μg(1μg/μl)定點注入 Wistar 雄性大鼠右側(cè)海馬CA3區(qū),海馬CA3區(qū)和額竇區(qū)安裝電極。手術(shù)后一部分歸入海人酸手術(shù)組,其余術(shù)后大鼠按 R ac ine 分級法觀察大鼠癇性發(fā)作行為,同時檢測各大鼠腦電圖。在術(shù)后0. 5-6小時內(nèi)若大鼠出現(xiàn)Ⅳ級及以上的癇性行為,并且腦電圖異常,表示癲癇模型建立成功。b、難治性癲癇模型的建立：將篩選出的癲癇模型大鼠,給予卡馬西平(125mg/kg)灌胃,每日1次,連續(xù)灌胃28天后

4、,觀察大鼠行為并監(jiān)測腦電圖,若大鼠仍有癇性行為發(fā)作并且腦電圖異常,表明難治性癲癇模型建立成功。c、假手術(shù)組：將等量的生理鹽水(1.5μl)注入大鼠右側(cè)海馬 CA3區(qū),海馬CA3區(qū)和額竇區(qū)均安裝電極。3、難治性癲癇模型標(biāo)準(zhǔn)：a、卡馬西平篩選28天后大鼠的癇性行為,按照R ac ine分級觀察：0 級：正常；Ⅰ級：面部痙攣抽動,包括動須、眨眼、節(jié)律性咀嚼；Ⅱ級：Ⅰ級加節(jié)律性點頭；Ⅲ級：Ⅱ級加前肢或后肢痙攣；Ⅳ級：站立并伴兩側(cè)前肢陣攣；Ⅴ級：

5、持續(xù)站立、傾倒、失平衡。發(fā)作達(dá)到Ⅰ級及以上即為行為異常。b、卡馬西平篩選28天后腦電圖：正常大鼠的腦電圖頻率為5~12 Hz,波幅 20~80μV,出現(xiàn)高幅尖波、棘波等異常波形可作為癲癇診斷依據(jù)。c、同時出現(xiàn)行為異常和腦電圖異常表明難治性癲癇模型造模成功。4、藥物治療：7 個實驗組分別給予相應(yīng)的藥物治療28天。5、檢測指標(biāo)：治療28天后處死各組大鼠,取大鼠胃竇粘膜及腎臟組織制作病理切片,心臟采血檢測大鼠凝血功能指標(biāo),即國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(I

6、nternational normalized ratio,INR),心肌損傷標(biāo)志物肌鈣蛋白T (cT nT )。結(jié)果：1、塞來昔布治療組、卡馬西平治療組、聯(lián)合治療組與生理鹽水組相比,胃竇粘膜病理學(xué)改變發(fā)生率均為0,無統(tǒng)計學(xué)差異；大劑量聯(lián)合治療組與生理鹽水組相比(p=0.485 , p>0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明卡馬西平聯(lián)合塞來昔布,卡馬西平聯(lián)合大劑量塞來昔布對難治性癲癇大鼠胃竇粘膜無影響。2、卡馬西平治療組與生理鹽水組腎臟

7、組織病變率均為0,無統(tǒng)計學(xué)差異；塞來昔布治療組與生理鹽水組腎臟組織病變率相比(p=1.00,p>0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義；聯(lián)合治療組與生理鹽水組腎臟組織病變率相比(p=1.00,p>0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義；大劑量聯(lián)合治療組與生理鹽水組腎臟組織病變率相比(p=0.485,p>0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明卡馬西平聯(lián)合塞來昔布,卡馬西平聯(lián)合大劑量塞來昔布在治療難治性癲癇大鼠時,對大鼠腎臟組織無影響。3、聯(lián)合治療組與生理鹽水

8、組血液INR值相比(p=0.179,p>0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義；大劑量聯(lián)合治療組與生理鹽水組INR值相比(p=0.212,p>0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明卡馬西平聯(lián)合塞來昔布,卡馬西平聯(lián)合大劑量塞來昔布在治療難治性癲癇大鼠時,對大鼠凝血功能無影響。4、海人酸手術(shù)組與假手術(shù)組相比,cTnT值明顯升高,有顯著性差異(p=0.00, p<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,提示采用海人酸海馬區(qū)快速點燃方法制作癲癇模型,并且未給予大鼠

9、抗癲癇藥物治療時,增加了大鼠心肌細(xì)胞的損傷；聯(lián)合治療組與生理鹽水組 cTnT 值相比(p=0.000 , p<0.05)、大劑量聯(lián)合治療組與生理鹽水組 cTnT 值相比(p=0.000, p<0.05),cTnT 均明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；大劑量聯(lián)合治療組與聯(lián)合治療組cTnT值相比(p=0.000,p<0.05),cTnT明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明卡馬西平聯(lián)合塞來昔布,卡馬西平聯(lián)合大劑量塞來昔布在治療難治性癲癇大鼠時,均降